[发明专利]基于Au-PB-SiO2复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法

权利要求书

1.一种Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒的制备方法，其特征在于，将正硅酸乙酯加入乙醇和双蒸水的混合溶液中，超声处理后，制得含有SiO₂纳米颗粒的溶液；将FeSO₄和K₃Fe(CN)₆加入到所述含有SiO₂纳米颗粒的溶液中，制得PB-SiO₂纳米颗粒；向所述PB-SiO₂纳米颗粒中加入N-(β-氨乙基)-氨丙基三乙氧基硅烷溶液使所述PB-SiO₂纳米颗粒表面氨基化，再加入金纳米颗粒溶液，制得Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒。

2.如权利要求1所述的制备方法制得的Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒。

3.一种电化学免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备如权利要求2所述的Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒与待检蛋白抗体共耦合物；

步骤2：将玻碳电极预处理，置待检蛋白抗体溶液中充分结合，封闭以除去非特异性结合位点，制得免疫电极；将所述免疫电极与含有不同浓度待检蛋白的标准品充分结合，除去非特异性结合位点，置于所述Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒与待检蛋白抗体共耦合物中充分结合，制得工作电极；在缓冲液中采用线性扫描伏安法进行电化学检测，以工作电极和免疫电极的响应电流值之差和标准品中待检蛋白的浓度绘制标准曲线；

步骤3：如步骤2，将所述免疫电极与待检样品混合温育，进行电化学检测，测得待测样品的电化学峰峰电流强度，从所述标准曲线上读取对应的待检蛋白的浓度。

4.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述玻碳电极预处理包括将所述玻碳电极抛光成镜面，超声处理后置于氯金酸溶液中，恒电位沉积。

5.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述缓冲液为pH值为6～7的PBS缓冲溶液。

6.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述线性扫描伏安法扫描范围为-0.2～0.6V，扫速为50mV/s。

7.如权利要求1至6任一项所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述待检蛋白为肿瘤标志蛋白。

8.如权利要求7所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述肿瘤标志蛋白包括胃泌素前体释放肽、神经元特异性烯醇化酶、CYFRA21-1、AFP、APT、CEA、CA242、CA125、CA199、CA153、CA724、CA50、f-PSA、t-PSA、Freeβ-hCG、SCCA、β2-MG。

9.如权利要求8所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述待检蛋白为神经元特异性烯醇化酶。