[发明专利]基于Au-PB-SiO2复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及电化学免疫领域，特别涉及一种基于Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法。

背景技术

肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率居全球首位，并呈逐年增多的趋势。小细胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)是恶性程度最高的肺癌，占所有肺癌病例的15～20％。肿瘤细胞具有分化程度低、倍增时间短、分裂指数高、早期易出现远处转移等特异的生物学行为，对放疗和化疗高度敏感，多数患者病情发展快，短期内死亡，因此，对小细胞肺癌进行早期诊断、制定合理治疗方案及评估疗效尤为重要。目前用于肺癌辅助诊断的主要方法有胸片、CT、以及痰细胞学检查等，而血清肿瘤标志物的检测由于取样简单、易于接受等特点，在肿瘤筛查、诊断、评价治疗疗效等方面具有较大的实用价值。

神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)是参与糖酵解途径的烯醇化酶中的一种，是神经内分泌细胞特有的一种酸性蛋白酶，存在于神经组织和神经内分泌组织中，在脑组织细胞的活性最高，外周神经和神经分泌组织的活性水平居中，最低值见于非神经组织、血清和脊髓液。它被发现在与神经内分泌组织起源有关的肿瘤中，特别是小细胞肺癌(SCLC)中有过量的神经元特异性烯醇化酶(NSE)表达，导致血清中NSE明显升高，是小细胞肺癌、神经母细胞瘤和恶性黑色素瘤的标志物，再加上血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与小细胞肺癌(SCLC)的临床分期呈正相关，因此，血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)检测对小细胞肺癌(SCLC)的监测病情、疗效评价及预测复发具有重要的临床价值。目前，国内外采用酶联免疫方法测定神经元特异性烯醇化酶(NSE)已处于临床应用阶段，但是酶联免疫法灵敏度不高，不易检测出痕量神经元特异性烯醇化酶(NSE)，影响对小细胞肺癌(SCLC)检测的准确性。

电化学免疫分析法(Electrochemical Immunoassay，ECIA)是将免疫技术与电化学检测结合的一种免疫分析新方法，基于抗原和抗体的特异性反应，将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。电化学免疫分析的标记物主要有两类：生物酶及电化学活性物质。用作标记物的电化学活性物质为具有电化学氧化还原性质的金属离子和电活性的有机功能基团。

纳米材料是指在三维空间中至少有一维处于纳米尺度范围(1～100nm)或由它们作为基本单元构成的材料，这大约相当于10～100个原子紧密排列在一起的尺度。由于纳米材料具有的高比表面积、高活性、特殊物理性质及小尺寸，使得纳米材料从一个惰性体转变为一个活泼的能提供电子和获取电子的物体，将其引入传感器的构建中可明显增强传感器的响应速度、灵敏度、选择性等。因此，提供一种灵敏度高、特异性好的基于复合纳米材料的电化学免疫检测方法用来检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)，对小细胞肺癌(SCLC)的早期诊断、病情监测、判断预后及其制定合理的治疗方案和评估疗效具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种基于Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒的电化学免疫检测方法。该检测方法采用双抗体夹心法，使固载在电极表面的神经元特异性烯醇化酶抗体与样品溶液中的神经元特异性烯醇化酶发生免疫反应，再和Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒与神经元特异性烯醇化酶抗体共耦合物结合。基于Au-PB-SiO₂复合纳米颗粒的电化学活性，测得的循环伏安还原峰峰电流值与神经元特异性烯醇化酶浓度呈正相关，进而检测检测样品中神经元特异性烯醇化酶的浓度。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：