[发明专利]一种电化学免疫检测方法

权利要求书

1.本发明提供一种纳米铂壳聚糖双重包裹硫堇-石墨烯的纳米复合物的制备方法，其特征在于，将硫堇加入石墨烯水溶液中，超声处理制得硫堇-石墨烯复合物；将所述硫堇-石墨烯复合物加入到壳聚糖溶液中，制得壳聚糖包裹的硫堇-石墨烯纳米颗粒；将所述壳聚糖包裹的硫堇-石墨烯纳米颗粒超声分散，与HPtCl₆混合后，逐滴加入NaBH₄还原制得所述纳米铂壳聚糖双重包裹硫堇-石墨烯的纳米复合物。

2.如权利要求1所述的制备方法制得的纳米铂壳聚糖双重包裹硫堇-石墨烯的纳米复合物。

3.一种电化学免疫检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：制备如权利要求2所述的纳米铂壳聚糖双重包裹的硫堇-石墨烯纳米复合物与辣根过氧化物酶标记的待测蛋白抗体共耦合物；

步骤2：将玻碳电极预处理后置于待测蛋白抗体溶液中充分结合，封闭以去掉非特异性结合位点，制得免疫电极；将所述免疫电极与含有不同浓度待检蛋白的标准品充分结合，置于所述纳米铂壳聚糖双重包裹的硫堇-石墨烯纳米复合物与辣根过氧化物酶标记的待测蛋白抗体共耦合物中充分结合，制得工作电极；采用线性扫描伏安法进行电化学检测，以工作电极和免疫电极的响应电流值之差和标准品中待检蛋白的浓度绘制标准曲线；

步骤3：如步骤2，将所述免疫电极与待测样品温育，进行电化学发光测试，测得待测样品的电化学峰峰电流强度，从标准曲线上读取对应的待检蛋白的浓度。

4.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述玻碳电极预处理包括将所述玻碳电极抛光成镜面，超声处理后置于氯金酸溶液中，恒电位沉积。

5.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述缓冲液为含有H₂O₂的pH值为5～6的醋酸缓冲溶液。

6.如权利要求3所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述线性扫描伏安法，电位扫描速度为50mV/s，扫描范围为-0.6～0.2V。

7.如权利要求1至6任一项所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述待检蛋白为肿瘤标志蛋白。

8.如权利要求7所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述肿瘤标志蛋白包括胃泌素前体释放肽、神经元特异性烯醇化酶、CYFRA21-1、AFP、异常凝血酶原、CEA、CA242、CA125、CA199、CA153、CA724、CA50、f-PSA、t-PSA、Freeβ-hCG、SCCA、β2-MG。

9.如权利要求8所述的电化学免疫检测方法，其特征在于，所述待检蛋白为异常凝血酶原。