[发明专利]可诱导性组织特异性表达载体及其用途

权利要求书

1.可诱导性组织特异性表达载体，其特征在于，主要包括以下结构：EF1α启动子， EGFP荧光标记基因， BGH polyA加尾转录终止序列和内含子序列；所述的载体为pEFG LPAL-MIR，具有序列1的结构。

2.按权利要求1所述的可诱导性组织特异性表达载体，其特征在于，所述的BGH polyA加尾转录终止序列为两端连有同向LoxP序列的转录终止序列。

3.按权利要求1所述的可诱导性组织特异性表达载体，其特征在于，所述的内含子序列其内部引入酶切位点。

4.权利要求1的可诱导性组织特异性表达载体的构建方法，其特征在于，其包括步骤：

1）插入EF1 alpha启动子

将EF1 alpha启动子序列插入到pEGFP-c1质粒中，得质粒pEFG；

2）插入LoxP-polyA-LoxP序列

将LoxP71和LoxP66和BGH polyA序列用重叠PCR的方法串联，得顺序为LoxP71-polyA1-LoxP66的DNA段，将其插入到pEFG载体中，得质粒pEFG LPAL；

3）插入intron序列

内含子序列intron D和intron R通过重叠PCR方法中间依次引入Bgl II，EcoR V，Sall I酶切位点，并将获得的DNA插入pEFG LPAL质粒SV40 polyA序列前，构建得pEFG LPAL-MIR，全长为6287bp，具有如序列1的结构。

5.按权利要求4的方法，其特征在于，所述步骤2的LoxP71和LoxP66为化学合成；所述的两个LoxP位点为顺位方向。

6.权利要求1的可诱导性组织特异性表达载体在提高miRNA的有效表达中的用途。

7.按权利要求6的用途，其特征在于所述的miRNA的有效表达是体外或体内有效表达。

8.权利要求1的可诱导性组织特异性表达载体在制备转基因试验动物模型中的用途。