[发明专利]用于检测Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶基因的组合物和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测β-内酰胺酶基因的组合物和试剂盒，具体地，本发明涉及用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的组合物和试剂盒。 

背景技术

β-内酰胺酶可以水解β-内酰胺类抗菌药物，根据其分子结构可以分为A、B、C和D四个大类。其中，B类β-内酰胺酶又称金属β-内酰胺酶，其能够水解的底物包括青霉素、头孢霉素和碳青霉烯类等抗生素。已发现的金属β-内酰胺酶包括IMP、VIM、GIM、SIM、SPM等型别。 

新德里金属-β-内酰胺酶(New Delthi Metallo-β-Lactamase I，NDM-1)基因是一种新的金属β内酰胺酶基因；携带该基因的细菌(多为革兰氏阴性菌)可对几乎所有抗生素产生抗性，俗称“超级细菌”。所述NDM-1基因还可以横向传递给其他致病菌，并呈现同样的耐药性，大大增加治疗的困难。所述NDM-1基因始发于印度次大陆，该地区抗生素的滥用现象异常严重。目前携带该基因的致病菌已传播至多个国家，已发现200多个感染病例，并有多例死亡。我国香港地区于2009年发现首宗个例。目前，我国大陆已发现NDM-1基因的存在，已发现病例并无可考的流行病史，考虑到我国也存在严重的抗生素滥用的现象，产NDM-1泛耐药细菌可能已经在我国一定范围内存在。 

然而因为研发针对NDM-1基因的新药，尤其是针对携带有NDM-1基因的革兰氏阴性菌抗生素仍然存在滞后；因此一旦发生由携带有NDM-1基因的致病菌所引起的疾病的大规模传播，将会面临几乎无药可治的局面。因此，NDM-1基因是人类健康的重大威胁。 

综上亟需能够实现快速、有效且准确检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的产品以用于病例诊治，病原学调查及防控政策的制定。 

发明内容

本发明的目的是解决现有技术缺乏检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因 的产品的问题，提供一种用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的组合物，使用该组合物可以实现对I型新德里金属β-内酰胺酶基因的快速、有效且准确的检测，来保证及时的病例诊治、准确的病原学调查以及科学的防控政策的制定。 

本发明的第二个目的是提供包括所述组合物的用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的试剂盒。 

本发明提供了一种用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的组合物，其中，所述组合物包括以下序列： 

1)长度为10-19个核苷酸的用于PCR扩增I型新德里金属β-内酰胺酶基因的第一引物，该引物的序列包括： 

a)SEQ ID No：1所示的序列， 

b)SEQ ID No：1所示的序列的至少10个核苷酸连续的片段，或者 

c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列； 

2)长度为10-18个核苷酸的用于PCR扩增I型新德里金属β-内酰胺酶基因的第二引物，该引物的序列包括： 

a)SEQ ID No：2所示的序列， 

b)SEQ ID No：2所示的序列的至少10个核苷酸连续的片段，或者 

c)与a)或b)具有至多5个核苷酸差异的序列； 

3)长度为10-24个核苷酸的与1)和2)所述引物的PCR扩增产物杂交的寡核苷酸探针，该探针的序列包括： 

a)SEQ ID No：3所示的序列或其互补序列，或者 

b)SEQ ID No：3所示的序列的至少10个核苷酸连续的片段， 

c)SEQ ID No：3所示序列的互补序列的至少10个核苷酸连续的片段， 

或者d)与a)或b)或c)具有至多5个核苷酸差异的序列； 

其中，3)所述的探针在5’端带有互不相同的荧光报告基团，并且在除5′端外的任意一个位置上带有荧光淬灭基团。 

本发明还提供了一种用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的试剂盒，该试剂盒含有聚合酶链式反应液及耐热DNA聚合酶，其中，所述试剂盒还含有本发明所述的组合物。 

本发明的用于检测I型新德里金属β-内酰胺酶基因的组合物和试剂盒，敏感性高、特异性好、反应快速、假阳性少且成本低，适合大规模的检测及筛查；可以实现对I型新德里金属β-内酰胺酶基因的快速、有效且准确的检测，因而能保证及时的病例诊治、准确的病原学调查以及科学的防控政策的制定。 

附图说明

图1为本发明实施例1在PCR引物扩增I型新德里金属β-内酰胺酶基因靶核酸序列后所得PCR扩增产物的电泳照片；