[发明专利]一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法

权利要求书

1.一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)将中药药材粉碎或者提取或者直接已经成药的中药复方。

(2)根据初步的预实验，将样品溶于水中，配制成不同的浓度供试液。

(3)试验时挑选大小相近、健康活泼的斑马鱼，随机投入到干净的玻璃缸中(每缸中12条)，在试验期过程中不喂食，以避免饲料的影响，实验窜温度为(20±2)℃。试验开始后持续观察4h，同时在120h内不定时观察，至少每6h观察1次，发现死鱼及时捞出，

(4)当鱼苗中毒停止呼吸以后，用小镊子夹鱼尾柄部，10分钟内鱼苗不出现反应，则判断为死亡，计算各组斑马鱼累计死亡率并作记录。以寇氏法计算LC50及95％可信限。

(5)根据LC₅₀进行毒性分级口：LC₅₀＜1.0mg，剧毒；LC₅₀＝1.0～100.0mg，高毒；LC₅₀＝100.0～1000.0mg，中等毒性；LC₅₀＝1000～10000.0mg，低毒；LC₅₀＞10000.0mg，微毒(无毒)。

2.根据权利要求1所述的一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法，其特征在于在步骤(1)中，所用的原料可以为药材粉末、中药提取物、中药浸膏、中药处方以及中药单体。。

3.根据权利要求1所述的一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法，其特征在于在步骤(2)中，用的溶剂可以为水，也可以为二甲亚砜。

4.根据权利要求1所述的一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法，其特征在于在步骤(3)中，所用的斑马鱼可以为斑马鱼，也可以为斑马鱼的受精卵或者胚胎；每个缸中的鱼的头数可以根据需要，调整为1～100条。

5.根据权利要求1所述的一种用模式生物斑马鱼筛选中药毒性的方法，其特征在于在步骤(4)中，判断与死亡的方法可以为3～15min；对于采用受精卵试验时，试验时观察陪她是否凝结、外包是否完成、有没有主动运动、水肿、色素、孵化是否延迟以及死亡等现象，以此判定药物对胚胎发育过程的影响以及毒性。