[发明专利]柱层析法从组分I中提取人纤维蛋白原的方法

权利要求书

1.一种柱层析法从组分I中提取人纤维蛋白原的方法，其特征在于，是由以下步骤实现：

(1)组分I沉淀的溶解及过滤：沉淀用5～15倍体积的第一溶解液，20-26℃搅拌溶解1小时，溶解后的制品澄清过滤，计量制品体积；所述的第一溶解液为：每1000ml注射用水溶液中含有：10～14g柠檬酸三钠，9g NaCl，8～12g蔗糖，2～4gTris，3～5g赖氨酸盐酸盐，用HCl调整pH值：6.90-7.10；

(2)S/D灭活：将制品温度控制在24～26℃，按每升滤液加100ml的比例，在搅拌状态下缓慢加入质量浓度的11％S/D灭活剂，保持制品温度24～26℃6小时；所述的11％S/D灭活剂为，1000ml注射用水溶液中含有：110g吐温-80，33g磷酸三丁酯；

(3)第一次甘氨酸沉淀：计量步骤2中灭活液体积，按1.5～2.2mol/L浓度加入甘氨酸粉末，充分溶解后冷却至2～8℃，以4200rpm的速度进行连续离心分离40分钟，设定温度0℃，收集沉淀；

(4)一次沉淀的溶解及过滤：沉淀用5～10倍体积的第二溶解液，在20-26℃搅拌溶解1小时，溶解后过滤，收集滤液；所述的第二溶解液为，1000ml注射用水溶液中含有：5～10g柠檬酸三钠，加HCl调整pH值：6.90-7.10；

(5)柱层析：DEAE-650M凝胶先用枸橼酸缓冲液平衡，再将步骤(4)中的滤液上柱进行层析，收集流出液，层析结束后用3倍柱床体积的枸橼酸缓冲液洗涤凝胶，并入流出液中；

(6)第二次甘氨酸沉淀：层析流出液按1.5～2.2mol/L浓度加入甘氨酸粉末，充分溶解后冷却至2～8℃，用离心机以4200rpm的速度进行连续离心分离40分钟，-5℃收集沉淀；

(7)二次沉淀的溶解及过滤：沉淀用3～5倍体积的第三溶解液，室温溶解1小时，溶解后，过滤；所述的第三溶解液为，1000ml注射用水溶液中含有：14～16.5g的枸橼酸钠，30～55g盐酸精氨酸，7～9g的氯化钠，用HCl或NaOH调整溶液pH6.9～7.1；

(8)配制：检测过滤后制品蛋白质含量，根据蛋白质含量用第三溶解液进行配制，使最终制品中蛋白含量为25g/L；

(9)分装及冻干：配制后制品除菌分装于50ml玻璃瓶中，25ml/瓶，分装后冻干；

(10)干热灭活：步骤9中冻干后制品置于水浴中，保持水浴温度100℃，30分钟。

所述的步骤(1)中所称的澄清过滤采用滤板澄清过滤，其滤板孔径为0.7μm～1.0μm；

所述的步骤(3)和步骤(6)中甘氨酸的浓度为1.5～2.2mol/L。