[发明专利]针对三种甘薯病毒的融合基因及其干涉载体

权利要求书

1.针对三种甘薯病毒的融合基因，其特征在于，所述融合基因的序列为SEQ1，命名为SPFLG。

2.根据权利要求1所述的融合基因，其特征在于，所述三种甘薯病毒为甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒和甘薯G病毒。

3.三种甘薯病毒的RNA干涉载体，其特征在于，其构建方法包括以下步骤：

（1）引物设计：根据三种甘薯病毒外壳蛋白基因核苷酸序列的保守区域设计两对引物，具体如下：

SPFLG-XbaI：5'-CCTtctagaTACGAGCTGCATTCAACCAC-3'，

SPFLG-SpeI：5'-AGTactagtCTGCACACCCCTCATACC-3'；

SPFLG-KpnI：5'-CCTggtaccTACGAGCTGCATTCAACCAC-3'，

SPFLG-ClaI：5'-AGTatcgatCTGCACACCCCTCATACC-3'；

（2）甘薯病毒RNA干涉载体构建：

将权利要求1所述的SPFLG基因克隆到T载体上，命名为SPFLG-T，以SPFLG-T为模板，分别以SPFLG-XbaI和SPFLG-SpeI及SPFLG-KpnI和SPFLG-ClaI为引物，进行PCR扩增，将获得的目的基因SPFLG分别用XbaI和SpeI及KpnI和ClaI酶切后，以反向重复的方式分别克隆到pBlue NiRIntron载体的内含子两侧；然后利用XbaI和KpnI进行双酶切，回收含有反向重复目的基因的片段，将其克隆到中间载体pROK219上，所述含有反向重复目的基因的片段位于35S启动子的下游、NOS终止子的上游，命名为pROKSPFLG；用EcoRI和HindIII酶切pROKSPFLG，回收包括35S启动子、反向重复片段和NOS终止子的目的片段，克隆到植物表达载体pBIN19上，命名为pBINSPFLG。

4. 根据权利要求3所述的RNA干涉载体，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸 40s，30个循环，最后72℃ 延伸10min。

5. 根据权利要求3所述的RNA干涉载体，其特征在于，所述三种甘薯病毒为甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒和甘薯G病毒。

6. 权利要求3所述的RNA干涉载体在防治病毒甘薯羽状斑驳病毒、甘薯潜隐病毒和甘薯G病毒中的应用。