[发明专利]高密度发酵高核热带假丝酵母生产核糖核酸的方法

权利要求书

1.一种搅拌罐制备核糖核酸的方法，包括：将保藏号为CGMCC No.3558的菌种在斜面培养基中活化后摇瓶培养，将摇瓶所得菌种在搅拌发酵罐中发酵，提取分离核糖核酸即得，其特征是：在搅拌发酵罐中发酵过程包括：先在发酵培养基中进行间歇发酵，3～8h后在不断加入补料培养基a和补料培养基b的情况下进行高密度发酵培养，当干菌浓度达到33～36g/L时，开始流加高密度连续发酵培养基进行高密度连续发酵，其中补料培养基a含250～350g/L糖蜜；补料培养基b含250～350g/L糖蜜、6～13g/L的硫酸镁、6～13g/L的尿素、1～4g/L的硫酸铵、0.5～3g/L的硫酸锌、0.5～3g/L的硫酸亚铁、0.3～1g/L的NaCl和10～30ml/L的磷酸。

2.权利要求1的方法，其中在斜面培养基中以28～31℃培养24～36h。

3.权利要求1的方法，其中斜面培养基含30g/L的葡萄糖、3g/L的牛肉膏、3g/L酵母膏、5g/L硫酸铵、0.1g/L无水硫酸亚铁和25g/L琼脂。

4.权利要求1的方法，其中摇瓶培养基含35～45g/L糖蜜、1.0～1.4g/L的硫酸镁、1.0～1.4g/L的尿素、0.1～0.5g/L的硫酸铵、0.05～0.3g/L的硫酸锌、0.05～0.3g/L的硫酸亚铁、0.05～0.2g/L的NaCl和1～3ml/L的磷酸。

5.权利要求1的方法，其中搅拌发酵罐中的间歇发酵的过程是：在搅拌罐中投入50～75％搅拌罐体积的间歇发酵培养基，在115℃下，高压灭菌30min；在温度降到30℃以下时，将摇瓶所得的菌种以1～10％体积比的菌种量接种到发酵罐中，以温度30～34℃，pH 3.8～4.5，溶氧率10-100％，压力0.02～0.1Mpa，搅拌转速180～400r/min的发酵条件发酵3～8h。

6.权利要求1的方法，其中高密度发酵是在间歇发酵后，pH刚进入上升阶段，罐内溶氧突然急速增加，干菌浓度达到5～6g/L时开始高密度发酵，在1～10min内流加与间歇培养基等量还原糖量的补料培养基a，以温度30～34℃、pH 3.9～4.5、溶氧率10-100％、压力0.02～0.1Mpa、搅拌转速180～400r/min的条件下继续发酵，当pH又进入上升阶段，罐内溶氧突然急速增加时，以相同的方式流加补料培养基进行发酵培养，以此重复至干菌浓度达到18-20g/L时，继续以相同的流加方式流加补料培养基b进行高密度发酵培养到干菌浓度达到33～36g/L为止。

7.权利要求1的方法，其中高密度连续发酵是在干菌浓度达到33～36g/L，pH刚进入上升阶段，罐内溶氧突然急速增加时开始进行高密度连续发酵，发酵稀释率从0.3逐渐提高到0.5、温度30～34℃、pH 3.9～4.5、溶氧率10-100％、压力0.02～0.1Mpa、搅拌转速180～400r/min。

8.权利要求1的方法，其中间歇发酵培养基含10～20g/L糖蜜、1.0～1.4g/L的硫酸镁、1.0～1.4g/L的尿素、0.1～0.5g/L的硫酸铵、0.05～0.3g/L的硫酸锌、0.05～0.3g/L的硫酸亚铁、0.05～0.2g/L的NaCl和1～3ml/L的磷酸。

9.权利要求1的方法，其中连续高密度发酵培养基含70～80g/L糖蜜、1.8～2.4g/L的硫酸镁、1.8～2.4的尿素、0.425～0.625g/L的硫酸铵、0.225～0.312g/L的硫酸亚铁、0.225～0.312g/L的硫酸锌、0.075～0.275g/L的NaCl和3～4ml/L的磷酸。