[发明专利]促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法。

背景技术

黄体生成素（LH）和卵泡刺激素（FSH）是由垂体前叶释放出来的，受控于下丘脑产生的LH-RH（促黄体生成素释放激素）或称GnRH（促性腺素释放激素），下文统称为促黄体生成素释放激素。LH-RH及其衍生物具有促进促性腺激素分泌的活性，按序给药LH-RH及其衍生物可抑制性腺功能，因此其可以用作药物以抑制和/或治疗诸如子宫内膜异位、中枢性早熟、不育和前列腺癌等疾病。已用作药物的LH-RH及其衍生物包括戈舍瑞林、布舍瑞林、亮丙瑞林和那法瑞林。其中，戈舍瑞林（Goserelin）和布舍瑞林（Buserelin）结构可表示如下：pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R，当R=Azgly-NH₂时，该结构式表示戈舍瑞林（Goserelin），当R=NHEt时，该结构表示布舍瑞林（Buserelin）。

因为结构上的极其相似，戈舍瑞林（Goserelin）和布舍瑞林（Buserelin）可以基于相同的合成工艺进行合成，目前戈舍瑞林（Goserelin）和布舍瑞林（Buserelin）的合成方法主要包括固相合成和液相合成两种。

液相合成操作繁琐，每合成一步都需要纯化，合成得率很低，不适合超过5个氨基酸以上的多肽合成。液相合成的原材料的价格已大大高于大规模工业化生产的Fmoc/tBu固相体系的原材料价格，因此，目前液相合成的方法已经被多肽合成工业体系所逐渐淘汰。

对于固相合成方法来说，一般采用多肽合成中的SPPS（a Solid Phase Peptide Synthesis）进行整个片段的全合成，如专利EP2119724A1和专利US2010/0311946A1中报道的那样。但是，促黄体生成素释放激素中的戈舍瑞林（Goserelin）和布舍瑞林（Buserelin）由于侧链D-Ser含有tBu和常规的Fmoc/tBu 固相反应体系不兼容，用常规的Fmoc/tBu 固相反应体系无法合成，故也有采用淘汰的液相合成或者改进的Fmoc/tBu 固相反应体系来生产。

例如，美国专利US5602231中报道了一种戈舍瑞林的固相合成方法，采用了侧链不保护的Trp，Ser, Tyr固相反应体系合成戈舍瑞林，由于侧链不保护的Trp，Ser, Tyr在Fmoc/tBu固相合成时会造成很多的副反应，导致合成的产物难以纯化，得率下降，而且采用不保护的氨基酸合成多肽对于工业化生产来说是非常难控制各种副反应的发生，故不适合工业化生产；美国专利US2010/0311946A1中报道了采用不常用侧链保护体系的Fmoc固相合成方法，采用了His（trt）,Ser(trt), Tyr(2-Cl-trt) 等原料合成戈舍瑞林，由于工业生产中很少厂家用到Ser(trt), Tyr(2-Cl-trt)这2个原料，很难找到工业化的供应商，因此不但价格昂贵，生产成本高，给企业大规模生产带来很大的成本压力，而且在最后trt保护基团脱除的时候，很难选择性的脱除trt而不影响D-ser含有的tBu，因此会产生各种不纯物，导致得率下降；专利EP0518656B1中同样采用了侧链不保护的Ser 和不常用侧链保护的Tyr(BrZ)的方法，是专利US2010/0311946A1和专利US5602231的复合体，同样无法解决不保护侧链引起的副反应和应用和很难找到工业化原料的供应商，原料价格昂贵和生产成本高等问题。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提出一种促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法，其通过将促黄体生成素释放激素分成两个片段分别固相合成，再拼接成整个片段的方法，从而克服了现有技术中的缺陷，使得本发明的合成方法具有适合放大生产、收率高、纯度好的优点。

为解决前述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种促黄体生成素释放激素衍生物的合成方法，所述促黄体生成素释放激素衍生物结构为pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R，R=Azgly-NH₂或NHEt，其包括以下步骤：

（1）固相合成第一片段pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-OH，其中，His、Ser、Tyr为侧链保护氨基酸；

（2）固相合成第二片段D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-R-固相支持物，其中D-Ser(tBu)的氨基端为保护基团Fmoc或Boc；