[发明专利]一种检测东南亚缺失型α地中海贫血的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测东南亚缺失型α地中海贫血的方法，其特征在于，

针对Genebank登录号为AE006462的α类珠蛋白基因，在东南亚缺失型α地中海贫血缺失片段断端的两侧设计一对引物Fd5和Rd3及探针Prob-D，在缺失片段5′端设计一条反向引物Rq5及探针Prob-Q，其中，所述引物Fd5为第155115至第155755位之间长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Rd3为与第174721至第175321位核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Rq5为与第155395至第155895位核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，所述Prob-D为与第174780至第174900位核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Prob-Q为与第155533至第155653位核苷酸序列区域互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Prob-D和Prob-Q标记不同波长的报告荧光基团；

提取待测样品DNA，以待测样品DNA为模板进行实时荧光PCR反应，根据实时荧光PCR的扩增曲线分析待测样品。

2.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述引物Fd5为SEQ IDNO：1所示核苷酸序列，Rd3为SEQ ID NO：2所示核苷酸序列，Rq5为SEQID NO：3所示核苷酸序列。

3.根据权利要求1或2所述检测方法，其特征在于，所述Prob-D为SEQID NO：4所示核苷酸序列；Prob-Q为SEQ ID NO：5所示核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述检测方法，其特征在于，所述Prob-D和Prob-Q为Tapman探针。

5.根据权利要求4所述检测方法，其特征在于，所述Prob-D标记的报告荧光基团为VIC，淬灭荧光基团为HBQ；所述Prob-Q标记的报告荧光基团为FAM，淬灭荧光基团为HBQ。

6.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述实时荧光PCR反应程序为：50℃，2min；95℃，10min；然后40个循环，每个循环95℃，30s；60℃，60s。

7.根据权利要求1所述检测方法，其特征在于，所述分析待测样品为当待测样本只出现Prob-Q检测信号时，判别为无东南亚缺失的正常基因样本；当待测样本只出现Prob-D检测信号时，判别为东南亚缺失型α地中海贫血纯合子样本；当待测样本出现Prob-Q和Prob-D两种检测信号时，判别为东南亚缺失型α地中海贫血杂和子样本。

8.一种用于检测东南亚缺失型α地中海贫血的试剂盒，其特征在于，包括引物Fd5、Rd3和Rq5与标记不同波长报告荧光基团的Prob-D和Prob-Q，其中，所述引物Fd5为第155115至第155755位之间长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Rd3为与第174721至第175321位核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Rq5为与第155395至第155895位核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，所述Prob-D为与第174780至第174900核苷酸互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列，Prob-Q为与第155533至第155653位核苷酸序列区域互补的长度为15bp～30bp的核苷酸序列。

9.根据权利要求8所述试剂盒，其特征在于，所述Fd5为SEQ ID NO：1所示核苷酸序列，Rd3为SEQ ID NO：2所示核苷酸序列，Rq5为SEQ ID NO：3所示核苷酸序列，Prob-D为SEQ ID NO：4所示核苷酸序列，Prob-Q为SEQID NO：5所示核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述试剂盒，其特征在于，所述Prob-D和Prob-Q为Tapman探针。

11.根据权利要求10所述试剂盒，其特征在于，所述Prob-D标记的报告荧光基团为VIC，淬灭荧光基团为HBQ；所述Prob-Q标记的报告荧光基团为FAM，淬灭荧光基团为HBQ。

12.根据权利要求8～11任意一项所述试剂盒，其特征在于，还包括对照样品，所述对照样品包括正常人基因扩增产物对照质粒，东南亚缺失型基因扩增产物对照质粒和由正常人基因扩增产物对照质粒与东南亚缺失型基因扩增产物对照质粒等量混合形成的杂合子基因扩增产物对照质粒。

13.根据权利要求8～12任意一项所述试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应液，所述PCR反应液包括10×PCR buffer、dNTP、MgCl₂溶液和酶液。