[发明专利]一种微生物转化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物转化方法领域，具体涉及一种生物催化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法。

背景技术

(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇，英文名：((3S)-3-(tert-Butoxycarbonyl)amino-1-chloro-4-phenyl-(2R)-butanol)，CAS号：162536-40-5，分子式C₁₅H₂₂NClO₃，分子量299.79。(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇是制备抗艾滋病药物阿扎那韦的关键中间体。阿扎那韦是一新型氮杂肽类蛋白酶抑制剂(PI)，是根据酶-氮杂肽复合物的X射线衍射研究设计而成的，具有C-2对称的化学结构。它是HIV-1蛋白酶的高选择性和高效的抑制剂，通过阻断病毒gap和gap-pol前体多聚蛋白的裂解，从而抑制病毒结构蛋白、逆转录酶、整合酶和蛋白酶的生成，使HIV-1感染的细胞释放出非感染性的不成熟的病毒颗粒。本品对多株HIV-1病毒具有比其他PI更强的抑制活性，在体外培养基中半数有效浓度(EC50)为2.6～5.3 nmol/L，90%有效浓度(EC90)为9～15 nmol/L。

拆分外消旋体(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-丁醇，可以获得(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇，但是拆分效率最大只有50%，生产效率不高。以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮为底物采用化学法和微生物法不对称还原底物中的羰基均可以得到(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。而化学法不对称还原需要制备手性化学催化剂，价格昂贵，制备过程繁琐，且通常环境污染较大。

发明内容

本发明目的是提供一种微生物转化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法，该方法反应条件温和，操作简便，环境友好，产物转化率高，易于工业化生产。                                                     

本发明采用的技术方案是：

一种微生物转化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法，所述方法是以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮为底物，以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）CGMCC No. 2266发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，进行转化反应制得所述(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。

所述酿酒酵母CGMCC No.2266，已在先前授权专利200810059686中作为新菌株予以保护，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，位于北京市朝阳区大屯路中国科学院微生物研究所内，保藏号CGMCC No.2266，保藏日期2007年11月26 日。 

所述酿酒酵母CGMCC No.2266的菌落特征：在琼脂培养基上呈现出乳白色、有光泽、平坦、边缘整齐、湿润、表面光滑，质地均匀的菌落形态。

进一步地，本发明所述的微生物转化制备(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇的方法为：以pH 5.0~8.0的磷酸盐缓冲液为反应溶剂，以(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮为底物、以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）CGMCC No. 2266发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，于25~45℃下转化反应12~72小时，反应结束后，转化液经分离纯化得到所述(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-(2R)-丁醇。

所述的(3S)-3-(叔丁氧羰基)氨基-1-氯-4-苯基-2-丁酮在磷酸盐缓冲液中的初始终浓度为0.1~1 mmol/L。