[发明专利]一种解脂假丝酵母菌株及用其制备长链二元酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种解脂假丝酵母菌株及用其制备长链二元酸的方法，尤其是制备十一碳二元酸的方法，属于微生物发酵领域。

背景技术

长链二元酸是化工合成高级香料、高性能尼龙工程塑料、热熔胶、涂料、润滑油、高温电介质、医药和农药等的重要原材料。DC₁₁(十一碳二元酸)是合成高性能尼龙1112、尼龙1110、尼龙1111、高级全合成润滑油和绿色农药等的重要原料。

DC₁₁自然界中不单独存在，化学方法无法合成，因此利用微生物特殊的氧化酶活力，在常温常压下发酵转化石油副产物中的正十一烷(nC₁₁)生产DC₁₁，开辟了DC₁₁的新来源，为尼龙1111和尼龙1110等一系列尼龙工程塑料新品种的工业生产，为全合成润滑油的工业生产，为农药蜕皮性信息素的合成生产提供了物美价廉的重要原料。

在以中科院微生物所陈远童为代表的一系列国内外长链二元酸的专利文献中，有许多用热带假丝酵母生产十二碳、十三碳、十四碳、十五碳、十六碳和十七碳二元酸的报道，但鲜有微生物发酵转化高产十一碳二元酸的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供了一种解脂假丝酵母菌株及用其制备长链二元酸的方法，该方法当原料正十一烷(nC₁₁)的纯度＞99％时，DC₁₁纯度达到99％。

本发明解脂假丝酵母(Candida lipolytica)CX-998号突变菌株是以一株在油田附近采集、分离筛选，按Lodder J.的酵母分类鉴定系统进行鉴定属于解脂假丝酵母，能氧化正烷烃生产二元酸的原始菌株为出发菌株，通过紫外线、亚硝酸和N⁺注入等方法，反复诱变和筛选培育出来的高产菌株，该菌株对正十一烷有较强的氧化酶活力、亲和力和乳化性。该菌株已于2011年3月24日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学)，保藏号为CCTCC NO：M2011094。该菌株在麦芽汁琼脂斜面上菌落乳白色，粘湿，光泽，有些菌落的表面褶皱，边缘不整齐；细胞形态呈圆形或卵圆形。

本发明的技术放案是：以上述菌株制备长链二元酸的方法，其特征是，在以C₁₀～C₁₈的正烷烃为基质的培养基中，用上述菌株发酵，然后经分离、提取、回收得到与正烷烃基质链相同的长链二元酸。

本发明的种子培养基：

(1)12Be′糖度的麦芽汁加麦芽汁重量1.8％的琼脂制成的固体斜面；

(2)12Be′糖度的麦芽汁液体培养基

培养种子的过程为：取一接种环解脂假丝酵母CX-998菌株，涂布在麦芽汁固体斜面上(每个茄子瓶中装有20ml培养基，灭菌后放成斜面)，于28℃培养40-44小时。取一支在茄子瓶培养好的上述解脂假丝酵母CX-998菌种全部刮入装有培养基的三角瓶中，于200rpm的旋转摇床，28℃培养44-48小时，作为发酵罐种子。

用本发明解脂假丝酵母CX-998菌株发酵转化生产长链二元酸，特别是十一碳二羧酸的具体方法是：把培养好并生长旺盛、无杂菌的发酵罐种子液接入pH6.0-7.2的含20-25％(v/v)的C₁₀～C₁₈正烷烃和80-75％(v/v)的发酵培养基的混合液中；所述种子液的接种量优选为(v/v)：18-24％；所述发酵培养基的组成为：NaAC 8-15g/L，优选为10-12g/L，KH₂PO₄ 4-14g/L，优选为8-10g/L，NaCl 1.0-1.5g/L，优选为1.0-1.2g/L，尿素1.0-2.5g/L，优选为1.2-1.5g/L，蔗糖10-20g/L，优选为12-16g/L，维生素C 0.5-1.5g/L，优选为1.0-1.2g/L，及一些公知的营养源。在pH7.0-8.2下，将混合液在26-32℃，优选在27-30℃，通风发酵转化70-160小时。在0-48小时，pH控制在7.0-7.5；在48-120小时，pH控制在7.5-7.8；在120小时以后，pH控制在7.8-8.2。

发酵结束后进行破乳，用过滤膜分离除去菌体和残烃，清液用活性炭脱色，脱色液用H₂SO₄或HCl酸化结晶，压滤、洗涤、吹干、烘干得白色DC₁₀～DC₁₈。