[发明专利]一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，是一种适用于PCR扩增的大豆分离蛋白的基因组DNA的提取方法。

背景技术

目前，关于植物全基因组DNA的提取已有不少研究和报道，但由于不同的植物或同一种植物的不同组织材料的组分各异，所适宜的提取方法也有所不同。大豆分离蛋白蛋白含量高，不利于DNA的溶出与提取。一般的植物基因组DNA提取方法无法从大豆分离蛋白中提取到基因组DNA，为下一步的以基因为基础的生物检测带来困难。现有大豆基因组DNA提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA。

发明内容

本发明的目的是为解决现有大豆基因组DNA提取方法的是以大豆幼苗叶片、大豆干种子、鼓粒期鲜豆荚为材料进行提取，上述提取方法无法从富含蛋白质的大豆分离蛋白中提取到基因组DNA的问题，进而提供一种大豆分离蛋白基因组DNA的提取方法。

本发明解决其技术问题所采用的方案是：首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。

本发明的有益效果是：可以从大豆分离蛋白中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。用本发明的方法得到的DNA的浓度为1558μg/ml，DNA的OD₂₆₀/OD₂₈₀的值为1.666。

具体实施方式

本发明较佳的实施方式是：首先将大豆分离蛋白与TE缓冲液充分混合制成TE混合液，然后加入混合液二倍体积的异硫氰酸胍裂解液，充分混匀，室温裂解。加入等体积的酚、氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液中加入等体积的氯仿/异戊醇抽提蛋白，离心后上清液加入等体积的氯仿再抽提蛋白，离心，上清液用异丙醇沉淀，离心，沉淀用乙醇洗涤，室温晾干，溶于TE缓冲液中即可基因组DNA的TE溶液。

所述的TE混合液中大豆分离蛋白为30～80mg，TE缓冲液为120～320μL。较佳的范围为大豆分离蛋白50mg，TE缓冲液200μL。

所述的异硫氰酸胍裂解液其中50～100mM pH 6.0～8.0Tris-HCl；10～100mM pH 8.0EDTA；5M异硫氰酸胍；1.3％Triton X-100。较佳的范围50mM pH 6.5Tris-HCl；20mMpH 8.0EDTA；5M异硫氰酸胍；1.3％Triton X-100。

所述的室温裂解时间为20～60min，较佳的裂解时间为30min。

所述的酚、氯仿/异戊醇的比例为25∶24∶1。

所述的氯仿/异戊醇的比例为24∶1。

所述的洗涤DNA沉淀的乙醇浓度为70～95％，较佳洗涤DNA的乙醇浓度为70％。

所述异丙醇的沉淀温度为-20～30℃，较佳的沉淀温度为-20℃。

所述异丙醇的沉淀时间为20～60min。

所述室温晾干的时间为10～15min。