[发明专利]一种离体叶片鉴定棉花黄萎病的方法

权利要求书

1.一种离体叶片鉴定棉花黄萎病的方法，其特征包括如下步骤：

1)将冰箱中试管保存的保藏号为CCTCC NO：M2011095的大丽轮枝菌6SY2-37转移至盛有PDA培养基的培养皿中，之后将培养皿放在恒温箱中进行活化，活化温度为25℃，活化时间为10-15d，取一直径约4mm的菌块放入盛有50ml Czapek’s培养基的三角瓶中，于25℃下振荡培养5-6d；

2)将步骤1)的病菌培养物用双层纱布过滤，在显微镜下用血球计数板统计孢子数，用无菌水将孢子调至5×10⁶个/ml的孢子悬浮液；

3)透明的聚乙烯保鲜盒经浓度75％的酒精消毒后，用无菌水冲洗2次，然后放入已裁剪好的海绵加水作为培养基；

4)从大田取棉株果枝上的成熟叶片作为外植体，在超净工作台上用浓度75％的酒精消毒，无菌水冲洗3-4次，然后放在灭菌的滤纸上，待水分被吸干后，叶柄蘸菌，浸入保藏号为CCTCC NO：M2011095的菌液浓度为5×10⁶个/ml的大丽轮枝菌6SY2-37孢子悬浮液中1-2s后立即取出，直立插入海绵切口处，叶间距为2-3cm，最后放置在25℃条件下的温室中进行离体培养，10d后观察棉花叶片发病情况。

其中：

步骤1)中所述的Czapek’s培养基配方为：FeSO₄0.02g/L，NaNO₃2g/L，MgSO₄1g/L，KCl1g/L，KH₂PO₄1g/L，蔗糖30g/L；pH6.0；补充蒸馏水至1L。

2.一株专用于离体叶片鉴定棉花黄萎病的大丽轮枝菌6SY2-37，保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏号为CCTCC NO：M2011095。

3.权利要求2所述的菌株在离体叶片鉴定棉花黄萎病中的应用。