[发明专利]一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法无效
| 申请号： | 201110084102.2 | 申请日： | 2011-04-06 |
| 公开（公告）号： | CN102146477A | 公开（公告）日： | 2011-08-10 |
| 发明（设计）人： | 廖力;徐淼锋;张卫东;黄国华 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国珠海出入境检验检疫局;湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 谭英强 |
| 地址： | 519015 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 its 基因 蔗扁蛾 实时 荧光 pcr 检测 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于ITS基因的蔗扁蛾实时荧光PCR检测方法，包括以下步骤：
取待检样品，采用SDS法提取基因组DNA，制备模板DNA，-20℃保存备用；
取上游扩增引物ITSTF402：5'-CTCCAACCGCCGCCTCCTCCTCAGT-3'（SEQ ID NO： 1）和下游引物ITSTR596：5'-CCAAGTCGCATCCGTGACGGTTCG-3'（SEQ ID NO： 2）及探针ITS194TM：5'-FAM-GAACCGCACCCGAGCGCGAGACG-TAMRA-3'、Premix Ex Taq和ddH2O，加入待检模板DNA，配成PCR反应体系，反应体系的总体积为25μl，各成分组成如下：12.5μl Premix Ex Taq(2×)、上、下游引物各0.75μl，浓度为10pmol/μl，5.5μl的ddH2O，0.5μl的探针，其浓度为10pmol/μl；5μl模板DNA；
PCR反应条件为：95℃ 3min预变性，95℃ 10s，60℃ 30s，循环45次；
读取Ct值判断检测结果。
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