[发明专利]基于液相芯片系统诊断地中海贫血的方法及试剂盒与应用

权利要求书

1.一种基于液相芯片系统诊断地中海贫血的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)设计PCR引物和探针序列，在与探针互补的链的PCR引物的5’端进行生物素修饰：PCR引物序列如下：

SEA For：5’-AGCGATCTGGGCTCTGTGTTC-3’；

SEA Rev：5’-CCAAGCCCACGTTGTGTTCATG-3’；

α^3.7 For：5’-CCCCTCGCCAAGTCCACC-3’；

α^3.7 Rev：5’-TCAAAGCACTCTAGGGTCCAGC-3’；

α^4.2 For：5’-CAGTTTACCCATGTGGTGCCT-3’；

α^4.2 Rev：5’-CCCGTTGGATCTTCTCATTTCC-3’；

α2 For：5’-CACAGTGAACCACGACCTCTA-3’；

α2 Rev：5’-CACAGAAGCCAGGAACTTGTC-3’；

α-M For：5’-CTCTTCTCTGCACAGCTCCTAA-3’；

α-M Rev：5’-CTGCCCACTCAGACTTTATTCAAA-3’；

β-M1 For：5’-CCAATCTACTCCCAGGAGCAG-3’；

β-M1 Rev：5’-TGAGGTTGTCCAGGTGAGC-3’；

β-M2 For：5’-CCTAATCTCTTTCTTTCAGGGCAAT-3’；

β-M2 Rev：5’-GCAGAATGGTAGCTGGATTGTAG-3’；

探针序列如下，探针5’末端进行Aminolinker C12修饰：

α-mut 1(N)：5’-GCGGTGCACGCCTCCC-3’；

α-mut 1(M)：5’-TGCGGTGCAGGCCTCCC-3’；

α-mut 2(N)：5’-CACGCCTCCCTGGACAAGTTC-3’；

α-mut 2(M)：5’-CACGCCTCCCCGGACAAGTT-3’；

α-mut 3(N)：5’-GCAAATACCGTTAAGCTGGAGCC-3’；

α-mut 3(M)：5’-GCAAATACCGTCAAGCTGGAGC-3’；

α-del SEA：5’-TGACGCTGTCTGCTTAAGGCCC-3’；

α-del 4.2：5’-CATGCCTGTAAACCCACCTACT-3’；

α-del 3.7：5’-TGGAGGAGGGAAAGTGGAGCCA-3’；

α2：5’-CCGCGCAGGCCCCGCCCGGGAC-3’；

β-mut 1(N)：5’-CAGGGCTGGGCATAAAAGTCA-3’；

β-mut 1(M)：5’-CCAGGGCTGGGAATAAAAGTCA-3’；

β-mut 2(N)：5’-GGGCTGGGCATAAAAGTCAGG-3’；

β-mut 2(M)：5’-GGCTGGGCACAAAAGTCAGG-3’；

β-mut 3(N)：5’-GGCTGGGCATAAAAGTCAGGG-3’；

β-mut 3(M)：5’-GCTGGGCATGAAAGTCAGGG-3’；

β-mut 4(N)：5’-GCTGGGCATAAAAGTCAGGGC-3’；

β-mut 4(M)：5’-CTGGGCATAGAAGTCAGGGCA-3’；

β-mut 5(N)：5’-CTAGCAACCTCAAACAGACACCA-3’；

β-mut 5(M)：5’-CACTAGCAACCTCAGACACCATG-3’；

β-mut 6(N)：5’-ACAGACACCATGGTGCATCTG-3’；

β-mut 6(M)：5’-ACAGACACCAGGGTGCATCT-3’；

β-mut 7(N)：5’-TACTGCCCTGTGGGGCAAG-3’；

β-mut 7(M)：5’-TACTGCCCTGGTGGGGCA-3’；

β-mut 8(N)：5’-CTGTGGGGCAAGGTGAACG-3’；

β-mut 8(M)：5’-CTGTGGGGCTAGGTGAACG-3’；

β-mut 9(N)：5’-AGTTGGTGGTGAGGCCCTG-3’；

β-mut 9(M)：5’-AGTTGGTGGTAAGGCCCTGG-3’；

β-mut 10(N)：5’-GTGGTGAGGCCCTGGGC-3’；

β-mut 10(M)：5’-TGGTGAGGCCCCTGGGC-3’；

β-mut 11(N)：5’-CCCTGGGCAGGTTGGTATCAA-3’；

β-mut 11(M)：5’-CCCTGGGCAGTTTGGTATCAAG-3’；

β-mut 12(N)：5’-TGGGCAGGTTGGTATCAAGGTTA-3’；

β-mut 12(M)：5’-TGGGCAGGTTGCTATCAAGGTTA-3’；

β-mut 13(N)：5’-ACCCTTAGGCTGCTGGTGG-3’；

β-mut 13(M)：5’-CACCCTTAGGTGCTGGTGGT-3’；

β-mut 14(N)：5’-ACCCAGAGGTTCTTTGAGTCCTT-3’；

β-mut 14(M)：5’-GGACCCAGAGGTTGAGTCCTTT-3’；

β-mut 15(N)：5’-GAGGTTCTTTGAGTCCTTTGGGG-3’；

β-mut 15(M)：5’-GAGGTTCTTTTAGTCCTTTGGGGA-3’；

β-mut 16(N)：5’-CGGTGCCTTTAGTGATGGCC-3’；

β-mut 16(M)：5’-CGGTGCCTTTAAGTGATGGCC-3’；

β-mut 17(N)：5’-CTGGGTTAAGGCAATAGCAATATC-3’；

β-mut 17(M)：5’-CTGGGTTAAGGTAATAGCAATATCTC-3’；

N表示正常探针，M表示突变探针；

(2)液相芯片的制备：将荧光编码微球与步骤(1)中所述的探针分别偶联，然后根据检测目的将偶联好探针的荧光编码微球混合，得到液相芯片；

(3)标本检测：

从标本中提取基因组DNA，根据检测目的选择步骤(1)中所述的PCR引物分别进行缺失型突变的α珠蛋白基因片段和非缺失型突变的α、β珠蛋白基因片段扩增，分别得到缺失型突变的α珠蛋白基因片段的PCR扩增产物和非缺失型突变的α、β珠蛋白基因片段的PCR扩增产物；接着将两种PCR扩增产物混合后与步骤(2)得到的液相芯片进行杂交，得到杂交产物；再用藻红蛋白对杂交产物进行标记，通过液相芯片检测仪读出检测结果。