[发明专利]一种实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的方法

权利要求书

1.一种用于实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的特异性引物，其特征在于，CSFV的特异性引物序列如SEQ NO.1-2所示。

2.一种用于实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的特异性探针，其特征在于，CSFV的特异性探针序列如SEQ NO.3所示。

3.根据权利要求2所述的用于实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的特异性探针，其特征在于，所述CSFV特异性探针的5'端标记发光基团FAM，3'端标记泯灭基团BHQ1。

4.一种使用如权利要求1所述的特异性引物和如权利要求2所述的特异性探针的实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S100、样品的预处理：对采集的样品分别进行编号，在样品中加适量青、链霉素双抗溶液，匀浆，取上清，4℃过夜；

S200、RNA提取：对采集的样品提取RNA；

S300、CSFV实时荧光定量RT-PCR反应：以上述步骤所提取的RNA为模板，加入CSFV特异性引物和特异性探针，使用TAKARA公司的一步法RT-PCR试剂盒进行PCR扩增；

S400、根据CSFV实时荧光定量RT-PCR反应结果，鉴定样品中是否含有CSFV。

5.根据权利要求4所述的实时荧光定量RT-PCR检测CSFV的方法，其特征在于，所述步骤S300中的实时荧光定量RT-PCR反应体系为25 μL，每条特异性引物终浓度为0.2μmol/L，特异性探针浓度为0.1μmol/L；

反应条件为42℃ 30min，92℃ 2min，92℃ 10s，55℃ 30s，40个循环。