[发明专利]利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法有效
申请号: | 201110086319.7 | 申请日: | 2011-04-07 |
公开(公告)号: | CN102212545A | 公开(公告)日: | 2011-10-12 |
发明(设计)人: | 于胜利;罗俊杰;丁方荣;李松;汤波;李宁 | 申请(专利权)人: | 北京济福霖生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N15/79 | 分类号: | C12N15/79;C12N5/071;C12N15/877;A01K67/027 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人: | 王加岭;张庆敏 |
地址: | 100193 北京市海淀*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 利用 核酸酶 球蛋白 基因 方法 | ||
1.一种利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)根据牛β-乳球蛋白基因序列,设计ZFNs-Set 1和ZFNs-Set 2,其作用的DNA序列分别为:
ZFNs-Set 1:CCCAGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGA;
ZFNs-Set 2:AGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGATAT;
2)构建ZFNs-Set 1和ZFNs-Set 2的真核表达载体;
3)将上述真核表达载体分别转入牛的成纤维细胞中,PCR扩增,测序检测β-乳球蛋白基因发生敲除的细胞。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述真核表达载体是pBudCE-ZFN1-2,它的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。
3.通过权利要求1或2所述的方法获得的基因敲除细胞。
4.权利要求1或2所述的方法在生产基因敲除克隆牛中的应用。
5.一种制备β-乳球蛋白基因敲除的牛克隆胚胎的方法,其以权利要求3所述的基因敲除细胞为核移植供体细胞,离体的卵母细胞为核移植受体细胞,通过核移植技术获得牛克隆胚胎。
6.一种制备转基因牛的方法,其是将权利要求5所述方法制备的克隆胚胎通过非手术法移入牛子宫内进行妊娠,获得转基因牛。
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