[发明专利]利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法有效

专利信息
申请号: 201110086319.7 申请日: 2011-04-07
公开(公告)号: CN102212545A 公开(公告)日: 2011-10-12
发明(设计)人: 于胜利;罗俊杰;丁方荣;李松;汤波;李宁 申请(专利权)人: 北京济福霖生物技术有限公司
主分类号: C12N15/79 分类号: C12N15/79;C12N5/071;C12N15/877;A01K67/027
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 王加岭;张庆敏
地址: 100193 北京市海淀*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 利用 核酸酶 球蛋白 基因 方法
【权利要求书】:

1.一种利用锌指核酸酶敲除牛β-乳球蛋白基因的方法,其特征在于,包括如下步骤:

1)根据牛β-乳球蛋白基因序列,设计ZFNs-Set 1和ZFNs-Set 2,其作用的DNA序列分别为:

ZFNs-Set 1:CCCAGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGA;

ZFNs-Set 2:AGGCCCTCATTGTCACCCAGACCATGAAGGGCCTGGATAT;

2)构建ZFNs-Set 1和ZFNs-Set 2的真核表达载体;

3)将上述真核表达载体分别转入牛的成纤维细胞中,PCR扩增,测序检测β-乳球蛋白基因发生敲除的细胞。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述真核表达载体是pBudCE-ZFN1-2,它的碱基序列如SEQ ID NO:1所示。

3.通过权利要求1或2所述的方法获得的基因敲除细胞。

4.权利要求1或2所述的方法在生产基因敲除克隆牛中的应用。

5.一种制备β-乳球蛋白基因敲除的牛克隆胚胎的方法,其以权利要求3所述的基因敲除细胞为核移植供体细胞,离体的卵母细胞为核移植受体细胞,通过核移植技术获得牛克隆胚胎。

6.一种制备转基因牛的方法,其是将权利要求5所述方法制备的克隆胚胎通过非手术法移入牛子宫内进行妊娠,获得转基因牛。 

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