[发明专利]硫酸类肝素二糖的制备纯化方法及其纯化产品

权利要求书

1.一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述方法是以肝素二糖为原料，经过阳离子交换树脂洗脱，吡啶调节洗脱液的pH至弱酸性，得到肝素吡啶二糖；所述的肝素吡啶二糖分别与1-甲基-2-吡咯烷酮的水溶液，乙酸酐，Na₂CO₃和硫磺三氧三甲胺联合体反应，反应液经凝胶树脂分离，纯化得到游离氨基二糖，N-乙酰二糖，N-硫酸化二糖。

2.根据权利要求1所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的肝素吡啶二糖的制备方法包括：

1）在2-5℃中，将肝素二糖水溶液通过阳离子交换树脂，之后再用1-3倍树脂体积的蒸馏水洗脱；

2）在室温中，用吡啶将所得的洗脱液在搅拌的状态下，中和至PH为6～6.5；

3）将中和后的溶液放至在-70℃下冷冻5小时以上，之后在真空冷冻干燥机中冷冻干燥，得到所述的肝素吡啶二糖。

3.根据权利要求1所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的游离氨基二糖是通过如下的制备纯化方法：

1）将肝素吡啶二糖溶于1-甲基-2-吡咯烷酮/水的混合溶液中，在水浴中反应8-12h，水浴温度为60-70℃，所述的1-甲基-2-吡咯烷酮与水的体积比为：8-9:1-2；

2）将反应后的溶液冷却，加入NaOH溶液，置于－4℃的条件下过夜；

3）将过夜后的反应液通过凝胶树脂，以超纯水作为溶剂洗脱，流速为0.5mL/min；

4）将紫外分光光度计检测波长置于232nm处，测量洗脱液的吸光度，收集第一个峰范围的样品，即为游离氨基二糖。

4.根据权利要求3所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的肝素吡啶二糖的加入量为1-4mg,所述的1-甲基-2-吡咯烷酮/水的混合溶液的体积为1-3mL；所述步骤2）NaOH溶液的浓度为0.05-0.02mol/L，加入体积为10-30μL。

5. 根据权利要求1所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的N-乙酰二糖是通过如下方法制备纯化：

1）将游离氨基二糖加入到PH为7-8的NaH₂PO₄ -Na₂HPO₄缓冲体系中，在4℃时恒温反应0.5-1小时；

2）在搅拌下逐渐加入相当于样品两倍摩尔量的乙酸酐，反应10-20分钟；

3）将反应液通过凝胶树脂，以超纯水作为溶剂洗脱，流速为0.5mL/min；

4）将紫外分光光度计检测波长置于232nm处，测量洗脱液的吸光度，收集第一个峰范围的样品，即为N-乙酰二糖。

6.根据权利要求5所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的NaH₂PO₄ -Na₂HPO₄缓冲体系的摩尔浓度为0.2-0.3mol/L，添加量为1-3mL，所述的游离氨基二糖的2-3 mg。。

7.根据权利要求1所述的一种硫酸类肝素二糖的纯化方法，其特征在于：所述的N-硫酸化二糖的制备是通过如下纯化方法：

1）在游离氨基二糖中加入1-3mL超纯水， 再加入分别相当于固体样品两倍质量的的Na₂CO₃和硫磺三氧三甲胺联合体，在水浴中反应8-12h；

2）将反应后的溶液通过凝胶树脂，以超纯水作为溶剂洗脱，流速为0.5mL/min；

3）将紫外分光光度计检测波长置于232nm处，测量洗脱液的吸光度，收集第一个峰范围的样品，即为N-硫酸化二糖。

8.根据权利要求7所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的游离氨基二糖的添加量为2-3 mg。

9. 根据权利要求1、3、5或7所述的一种硫酸类肝素二糖的制备纯化方法，其特征在于：所述的凝胶树脂包括Sephadex-G-15树脂柱。

10. 一种如权利要求1、2、3、4、5、6、7、8或9所述的硫酸类肝素二糖的纯化方法得到的纯化产品，其特征在于：所述的纯化产品包括游离氨基二糖，N-乙酰二糖，N-硫酸化二糖。