[发明专利]一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法

权利要求书

1.一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、原料处理：利用蛹虫草匀浆制得浆料或者制得干粉；

S2、利用所述浆料或干粉基于碱液提取法或酶提取法提取虫草多糖，获得虫草多糖提取液；

S3、对所述虫草多糖提取液基于中温淀粉酶清除淀粉，灭活分离，得上清液；

S4、将所述上清液，真空浓缩至多糖含量为1.5～3.0％；

S5、向浓缩液中加入乙醇，至乙醇最终浓度75～80％，在0～4℃温度下，醇沉12～16小时；

S6、醇沉后，以3000～4000转/分钟离心分离，蒸干乙醇，得沉淀状虫草粗多糖。

2.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S6之后还包括：S7、所述沉淀状虫草粗多糖经喷雾干燥或者在-10～-50℃的温度下真空干燥，得到干燥的虫草粗多糖。

3.根据权利要求2所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S7之后还包括：S8、所述干燥的虫草粗多糖经粉碎制得粉状虫草粗多糖产品。

4.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S6之后还包括去除蛋白及小分子的步骤：

S9、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液，混合三氯乙酸溶液，在0～4℃条件下振摇后，离心分离，取上清液部分的多糖溶液；重复以上脱蛋白步骤，混合上清液，利用乙醇醇沉后离心分离，取沉淀配成3～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

5.根据权利要求4所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S9的具体步骤为：所述沉淀状虫草粗多糖配置成2～10％的溶液，在4℃条件下缓慢加入10％三氯乙酸溶液，体积比为5∶1，搅拌；在4℃条件下振摇10分钟后，在4℃条件下高速离心10分钟，取上清液重复以上脱蛋白步骤数次，至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量为0.5％；

而后向溶液中加入4.5倍体积95％的乙醇醇沉12～16小时，高速离心，取沉淀，配成3～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后，袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

6.根据权利要求1所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S6之后还包括去除蛋白及小分子的步骤：

S10、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液，加入胃蛋白酶，用HCl调pH1.5～3.0、温度37～42℃条件下，酶解后于90～98℃灭酶，冷却至室温，用NaOH溶液调至中性，离心分离，取上清液利用乙醇醇沉，离心分离，取沉淀配成2～5％的溶液，以体积比为4～5∶1的比例加入氯仿与正丁醇体积比为4～5∶1的Sevag试剂，振摇后静置，离心除去沉淀，取上清液重复以上脱蛋白步骤，而后利用乙醇醇沉，离心分离，取沉淀配成2～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

7.根据权利要求6所述从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，其特征在于，步骤S10的具体步骤为：所述沉淀状虫草粗多糖配置成2～10％的溶液，加入溶液重量的0.05～1％的胃蛋白酶，用6mol/L的HCl调pH1.5～3.0，在37℃条件下酶解1～6小时；而后于90～98℃灭酶10分钟，冷却至室温，用NaOH溶液调至中性，离心10分钟，取上清液，加入3～4.5倍体积95％乙醇，在0～4℃的温度下，醇沉12～16小时左右；

离心，取沉淀，配制成2～5％的溶液，加入Sevag试剂，剧烈振摇20分钟，静置30分钟，离心除去沉淀，取上清液重复以上脱蛋白步骤数次，至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量至0.5％；

而后向溶液中加入4.5倍体积95％的乙醇醇沉12～16小时，高速离心，取沉淀，配成2～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后，袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。