[发明专利]一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品领域，更具体地说，涉及从蛹虫草培养基中提取多糖的方法。

背景技术

蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)又称北冬虫夏草，属于子囊菌亚门(Asconlycotina)、核菌纲(Pyrenomycetes)、球壳菌目(Sphaeriales)、麦角菌科(Claviciptiaceae)、虫草属(Cordyceps)与冬虫夏草(Cordyceps Sinensis(Berk)Sacc)同属异种。能够产生多种生物活性物质：多糖、甘露醇、虫草素、甾类等。近年来，蛹虫草人工培养及其活性成分的研究尤为活跃。

虫草多糖是一类高分子复合物，它作为蛹虫草的主要活性成分之一，是蛹虫草中含量最高的药理活性物质。大量药理学实验表明，虫草多糖具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化、保护肾脏、镇痛及抗放作用。

人工栽培的蛹虫草在营养生长阶段在培养基内长着大量的菌丝体，据研究菌丝体中含量最多的活性成分就是虫草多糖。

目前国内外公开报道的有关蛹虫草培养基中虫草多糖的提取，都只限于热水浸提，或利用超声波等辅助物理方法，提取率相对较低，而且其中混有大量的淀粉未经出去，影响虫草多糖的品质。

发明内容

本发明的目的是提供一种工艺方法，以蛹虫草大米或小麦培养基残基为原料，有效提取虫草多糖，并将其进行有效的分离纯化。

为了达到上述目的，本发明提供一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法，包括如下步骤：

Step 1、原料处理：利用蛹虫草匀浆制得浆料或者制得干粉；

Step 2、利用所述浆料或干粉基于碱液提取法或酶提取法提取虫草多糖，获得虫草多糖提取液；

Step 3、对所述虫草多糖提取液基于中温淀粉酶清除淀粉，灭活分离，得上清液；

Step 4、将所述上清液，真空浓缩至多糖含量为1.5～3.0％；

Step 5、向浓缩液中加入乙醇，至乙醇最终浓度75～80％，在0～4℃温度下，醇沉12～16小时；

Step 6、醇沉后，以3000～4000转/分钟离心分离，蒸干乙醇，得沉淀状虫草粗多糖。

此外为了得到干燥的虫草粗多糖或粉状产品，Step 6之后可以采取如下步骤：

Step 7、所述沉淀状虫草粗多糖经喷雾干燥或者在-10～-50℃的温度下真空干燥，得到干燥的虫草粗多糖。

Step 8、所述干燥的虫草粗多糖经粉碎制得粉状虫草粗多糖产品。

而为了获得精制虫草多糖，Step 6之后可以采取Step 9、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液，混合三氯乙酸溶液，在0～4℃条件下振摇后，离心分离，取上清液部分的多糖溶液；重复以上脱蛋白步骤，混合上清液，利用乙醇醇沉后离心分离，取沉淀配成3～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

优选方式下，Step 9的具体工艺参数及过程如下：所述沉淀状虫草粗多糖配置成2～10％的溶液，在4℃条件下缓慢加入10％三氯乙酸溶液，体积比为5∶1，搅拌；在此4℃条件下振摇10分钟后，在4℃条件下高速离心10分钟，取上清液重复以上脱蛋白步骤数次，至多糖溶液中福林酚法检测蛋白含量为0.5％。而后向溶液中加入4.5倍体积95％的乙醇醇沉12～16小时，高速离心，取沉淀，配成3～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后，袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。

此外，为了获得精制虫草多糖，Step 6之后还可以采取Step 10、所述沉淀状虫草粗多糖配置成溶液，加入胃蛋白酶，用HCl调pH1.5～3.0、温度37～42℃条件下，酶解后于90～98℃灭酶，冷却至室温，用NaOH溶液调至中性，离心分离，取上清液利用乙醇醇沉，离心分离，取沉淀配成2～5％的溶液，以体积比为4～5∶1的比例加入氯仿与正丁醇体积比为4～5∶1的Sevag试剂，振摇后静置，离心除去沉淀，取上清液重复以上脱蛋白步骤，而后利用乙醇醇沉，离心分离，取沉淀配成2～5％的多糖液，在截留分子量为7000Da～8000Da的透析袋内透析48～72小时，透析后袋内液浓缩，冷冻干燥得精制虫草多糖。