[发明专利]一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分分离技术领域，特指一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法。

背景技术

桑叶是桑科植物桑的干燥叶，味甘，性寒，在我国多有种植，可入药，具有清热、名目的功效。随着科学技术的发展，人们对桑叶的研究也越来越多，近年来学者们发现桑叶中有一种特殊的降血糖的物质，即1-脱氧野尻霉素（1-deoxynojirimycin,DNJ），而我国以及世界的糖尿病患者日趋增多，所以桑叶中的1-脱氧野尻霉素越来越受到研究者们的青睐。

一般认为，1-脱氧野尻霉素降血糖的机理为：DNJ为a-糖苷酶的抑制剂，可阻碍其与二糖的结合，使得摄取的多糖、寡糖和双糖酶解成单糖的过程受阻，因而有着明显的降血糖的功效。

我国对桑叶中降血糖的研究方面起步较晚，而且真正应用于生产的工艺较少。CN101020655A公开的方法是以干燥桑叶为原料，通过醇液提取，加入酸酸化后，过阳离子交换树脂，再使用碱性醇液进行洗脱，经干燥制成桑叶提取物初品，过程简单，但提取物中1-脱氧野尻霉素的含量仅为10%左右。CN10134586A公开的方法是以桑叶初提物为原料（含DNJ40%以上），水溶后，直接过阳离子树脂，再使用洗脱液进行洗脱并分步收集，最后经多次重结晶得到纯度较高的产品，由于重结晶使用的混合溶剂不易分离回收利用，所以生产成本较高。CN101671294A公开的方法不仅分离得到了DNJ产品，同时还从桑叶中得到了另一产品桑叶黄酮，具体是为以干燥桑叶为原料，使用乙醇进行提取，离心过滤，加入絮凝剂絮凝沉淀；滤液依次通过大孔吸附树脂与阳离子树脂后进行喷雾，即得DNJ产品，此方法由于工艺较长，加上使用絮凝沉淀方式，损失较大，其最终的得率也较低，这是此方法最大的不足之处。

发明内容

本方面的目的提供一种从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法，其可以直接以干燥桑叶原料分离制备纯度95%以上的1-脱氧野尻霉素产品，且生产效率较高，成本较低。

本发明从桑叶中提取分离1-脱氧野尻霉素的方法包括以下步骤：

（1）原料前处理：将桑叶原料粉碎至10-30目；

（2）酶解：向粉碎后的桑叶原料中加入相当于其重量8-12倍量的水，升温至40-60℃后，加入相当于桑叶原料重量0.1%-0.6%的组合酶，保温酶解6-8h 后，过滤，得酶解原料；

（3）碱醇提取：向酶解原料中加入相当于桑叶原料重量5-8倍量50%-80%的亲水溶剂后，再向其中加入相当于桑叶原料重量0.05%-0.2%的碱性固体物质，搅拌15-45min后，加温至60-80℃回流提取1-3次，每次110-130min，冷却至0-15℃，过滤，得提取液；

（4）酸溶、超滤：将提取液在60-70℃下进行低压浓缩，浓缩至原提取液体积的1/20至1/30，冷却至0-15℃，静置8-12小时，收集沉淀，加入相当于原提取液体积1/30-1/40的体积百分比浓度为0.5-1.5%的酸溶液，搅拌，使其充分溶解后，过滤，将滤液通过超滤膜，得超滤液；

（5）阳离子树脂除杂：将所得超滤液通过阳离子树脂后，使用4-8倍量树脂体积的1%-5%（w/v）氨醇溶液进行洗脱，收集洗脱液；

（6）大孔吸附树脂分离：将步骤（5）得到的洗脱液浓缩至原来体积的1/5-1/10，然后通过大孔吸附树脂，用5-8倍量树脂体积的40%-70%（体积）乙醇溶液洗脱，收集洗脱液；

（7）结晶与重结晶：将步骤（6）所得洗脱液进行浓缩，浓缩至原来体积的1/6-1/8，加入相当于步骤（6）所得洗脱液体积1/6-1/4的甲醇-饱和氨水混合溶剂，调节温度，冷却析晶，得结晶体，干燥，即成。

步骤（2）中加入的组合酶可由纤维素酶与果胶酶组成，其纤维素酶与果胶酶的重量比宜为3-5：1。

步骤（3），所述亲水溶剂可为C1-C4的醇液；加入的碱性固体物质可为氢氧化钠、碳酸钠或者氢氧化钙。

步骤（4），加入的酸性溶液可为体积百分比浓度为1%的盐酸、硫酸或者磷酸溶液。

步骤（5），所述阳离子树脂可为D151、D110或D113树脂。

步骤（6），所述大孔吸附树脂可为AB-8、XAD-7、XAD-9或者LSD201。

步骤（7），所述甲醇-饱和氨水混合溶剂中，甲醇与氨水体积比宜为5-15：1；析晶温度宜为-5℃-10℃，重结晶次数优选2-3次。

本发明方法得到的桑叶提取物产品，经高效液相色谱法检测，产品中DNJ含量达95%以上，得率0.04%左右。