[发明专利]丹参内生真菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及丹参内生真菌及其应用。

背景技术

丹参酮是具有活血化瘀作用的中药丹参主要的脂溶性成分，其中丹参酮I和丹参酮IIA是其主要的有效成分。丹参酮I抗菌活性很强，比小檗碱强许多倍；丹参酮IIA具有天然抗氧化作用，临床在心脑血管疾病、肾脏疾病、肝脏疾病等方面应用广泛。目前，丹参酮I和丹参酮IIA主要来源于唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的根。虽然丹参资源区域广阔，且已进行大量的人工栽培；但是其分布星散，资源更新周期长，且人工栽培技术要求高，药材质量参差各异。随着丹参酮I和丹参酮IIA众多药理活性的发现，其市场需求增大，通过直接采收丹参天然和人工资源将不能满足市场需求。另一方面，丹参酮I和丹参酮IIA化学合成困难，难以实现产业化。研究者们试图通过生物技术方法获得丹参酮I和丹参酮IIA，因此，近年来这已成为人们关注的课题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种新的丹参内生真菌，并提出其用途，即能够通过微生物发酵产生丹参酮类化合物丹参酮I和丹参酮IIA。

为了解决前述技术问题，本发明提供了一种丹参内生真菌，命名为深绿木霉Trichoderma atroviride。本发明所述的丹参内生真菌是从唇形科鼠尾草属植物丹参(Salviamiltiorrhiza Bunge)植物活体中采用内生真菌分离纯化技术分离获得的，经微生物分类学鉴定为深绿木霉(Trichoderma atroviride)。该菌株已保藏，保藏日期为2011年03月27日，保藏号为CGMCC No.4712，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，邮编：100101。

本发明所述的丹参内生真菌的固体培养特征为：在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上26℃培养，生长迅速，菌落在3天内覆盖直径80mm的平板，呈辐射状，表面疏松、平坦，菌丝无色；在培养的第5天明显可见有孢子产生，最初为淡绿色，以后逐渐增多，呈现深绿色，产孢丛束排列成同心的轮纹；有椰子气味(甜味)。

本发明所述的丹参内生真菌的液体培养特征为：

(1)培养基PDA，摇瓶培养10天，培养温度26±1℃；

(2)发酵培养特征：

培养第1-2天有少许1-2mm白色菌丝球出现，培养液澄清；培养第3-4天，菌丝球直径增大至3-4mm，培养液开始变浑浊；培养第5-8天，菌球数量增多，培养液浑浊；培养第9-10天，白色菌球体直径为4-5mm，培养液又变澄清。

本发明所述的丹参内生真菌形态特征为：培养的菌丝体无色、分枝繁复，由具有横隔的分枝菌丝构成，分枝角度为近似90°；分生孢子梗的可育延伸物没有或者很少产生，没有不育的菌毛。虽然成对着生的分枝比较常见，但是分生孢子梗的典型分枝方式为单侧分枝；分生孢子绿色，亚球形至卵圆形，没有明显的脱落痕迹，光滑，成簇着生于分生孢子梗的顶端。

本发明所述的丹参内生真菌的ITS和5.8S rDNA碱基序列如SEQ ID NO.1所示为：

CCGAGTTTACAACTCCCAAACCCAATGTGAACCATACCAAACTGTTGCCTCGGCG

GGGTCACGCCCCGGGTGCGTCGCAGCCCCGGAACCAGGCGCCCGCCGGAGGGACCA

ACCAAACTCTTTTCTGTAGTCCCCTCGCGGACGTTATTTCTTACAGCTCTGAGCAAAA

ATTCAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGA

ACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTT

TGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTTC

AACCCTCGAACCCCTCCGGGGGGTCGGCGTTGGGGACCTCGGGAGCCCCTAAGACG

GGATCCCGGCCCCGAAATACAGTGGCGGTCTCGCCGCAGCCTCTCCTGCGCAGTAGT

TTGCACAACTCGCACCGGGAGCGCGGCGCGTCCACGTCCGTAAAACACCCAACTTCT

GAAATG