[发明专利]检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的方法及其专用酶联免疫试剂盒

权利要求书

1.一种豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.4617的豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体杂交瘤细胞株CpTI 3D6分泌产生的。

2.保藏编号为CGMCC No.4617的豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体杂交瘤细胞株CpTI 3D6。

3.权利要求1中所述的豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体在制备检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的酶联免疫试剂盒中的应用。

4.一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的酶联免疫试剂盒，含有权利要求1所述豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体、豇豆胰蛋白酶抑制剂的多克隆抗体、豇豆胰蛋白酶抑制剂标准品；所述豇豆胰蛋白酶抑制剂标准品为豇豆胰蛋白酶抑制剂。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述豇豆胰蛋白酶抑制剂标准品的浓度为100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.1ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL和0.39ng/mL。

6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中含有用于标记所述豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体的标记酶。

7.根据权利要求4-6中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中包括包被缓冲液、洗涤液、底物缓冲液、终止缓冲液和封闭液；

所述包被缓冲液由Na₂CO₃、NaHCO₃和水组成；

以上各成分在包被缓冲液中的浓度分别为：Na₂CO₃0.01M和NaHCO₃0.04M；

所述洗涤液由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、吐温-20和水组成；

以上各成分在洗涤液中的浓度分别为：Na₂HPO₄0.02M、KH₂PO₄0.0015M、NaCl0.14M和吐温-20的体积百分比浓度为0.1％；

所述底物缓冲液由柠檬酸三钠、Na₂HPO₄和水组成；

以上各成分在底物缓冲液中的浓度分别为：柠檬酸三钠0.01M和Na₂HPO₄0.03M。

所述终止缓冲液由硫酸和水组成；

所述硫酸在所述终止缓冲液中的浓度为2M；

所述封闭液由Na₂HPO₄、KH₂PO₄、NaCl、脱脂牛奶和水组成；

以上各成分在封闭液中的浓度分别为：Na₂HPO₄0.02M、KH₂PO₄0.0015M、NaCl0.14M和脱脂牛奶的质量百分比浓度为3％。

所述标记酶为辣根过氧化物酶。

8.一种检测豇豆胰蛋白酶抑制剂的方法，包括如下步骤：将待测样品进行前处理，得到样品检测液；再用权利要求4-7中任一所述的试剂盒对样品检测液进行检测；

所述前处理的方法包括如下步骤：将所述待测样品研磨后，用PBS缓冲液进行浸泡，得到浸泡后的混合物；将所述混合物进行离心，取上清，即得到样品检测液；所述浸泡的时间为12小时；所述离心的转速为8000r/min和离心的温度为4℃。

9.权利要求1中所述豇豆胰蛋白酶抑制剂单克隆抗体、权利要求4-7中任一所述试剂盒或权利要求8所述方法在鉴别转CpTI基因植物中的应用。

10.一种辅助鉴别转CpTI基因植物的方法，包括如下步骤：用权利要求4-7中任一所述试剂盒对待测植物进行检测，以已知的非转基因植物作为对照，若对待测植物进行检测时检测孔的吸光值大于所述对照的3倍，则确认所述待测植物为候选的转CpTI基因植物。