[发明专利]铬离子抗原及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及铬离子抗原及其制备方法与应用。

背景技术

铬是国内外食品、药物、环境等样品中重要的污染物质之一。重金属铬在环境中主要以三价铬和六价铬的形式存在。其中，六价铬的毒性比三价铬高得多，对皮肤粘膜有刺激和腐蚀作用，并且更容易为人体吸收、蓄积，已被确认为致癌物，因此，重金属铬的摄入量及其价态对人体健康有很大影响。重金属铬的化合物广泛应用于制革、冶金、纺织品生产及镀铬等行业，环境中的铬含量在不断的增加，因此，重金属铬也成为各国环境监测中的必测元素，六价铬的测定方法也受到环境监测者的广泛关注。

铬的测定方法较多，主要有分光光度法、化学发光法、原子吸收光谱法、荧光分析法、电化学分析法和离子色谱法等。这几种仪器检测方法检测重金属铬的含量不仅需要昂贵的仪器设备，而且检测费用高、检测时间长和检测步骤繁杂，不能用于现场的快速检测。免疫检测技术已被广泛应用于毒素、杀虫剂、炸药等的环境污染和危险物的检测，与其他检测系统相比，免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏和特异的优点，可便携进行现场检测。免疫检测试剂盒可以快速检测某一特定物质的含量，但要将免疫分析法应用到检测重金属铬离子，必须制备相应的抗原和抗体。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种制备铬离子抗原的方法。

本发明所提供的制备铬离子抗原的方法，包括如下步骤：

(1)将螯合剂进行重氮化反应，得到重氮化螯合剂；

(2)将所述步骤(1)得到的重氮化的螯合剂与载体蛋白进行偶联反应，得到偶联产物；

(3)将所述步骤(2)得到的偶联产物与铬离子进行络合反应，得到络合物，即得到铬离子抗原。

所述步骤(1)中所述重氮化反应的方法包括以下步骤：

将所述螯合剂溶于酸的水溶液中，得到溶液I；再向所述溶液I中加入亚硝酸盐水溶液，得到溶液II；将所述溶液II在温度为0℃-5℃或0℃或4℃或5℃、避光和反应时间为15min的条件下进行反应，即得到所述重氮化螯合剂。

所述步骤(2)中所述载体蛋白与所述重氮化螯合剂的投料摩尔比为1∶(5-25)或1∶10或1∶5或1∶25；

所述偶联反应是在温度为4℃-10℃或4℃或7℃或10℃和反应时间为4h-24h或12h或4h或24h的条件下进行；

所述载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清白蛋白或人血清白蛋白或血蓝蛋白。

所述步骤(3)中所述偶联产物与所述铬离子的投料摩尔比为1∶(1-10)或1∶3或1∶1或1∶10；

所述络合反应是在温度为4℃-25℃或25℃或4℃或15℃、pH值为7.0-8.0或7.0或7.5或8.0和反应时间为4h-24h或12h或4h或24h的条件下进行。

所述步骤(1)中所述的螯合剂与所述酸的投料摩尔比为1∶(4-10)或1∶10或1∶7或1∶4；

所述螯合剂与所述亚硝酸盐的投料摩尔比为1∶(1-3)或1∶2或1∶1或1∶3；

所述螯合剂为对氨基苯甲基乙二胺四乙酸；

所述的酸为盐酸或硫酸或硝酸或过氯酸或氟硼酸；

所述亚硝酸盐为亚硝酸钠。

所述步骤(2)中所述偶联反应还包括将所述偶联产物进行透析，得到纯化的偶联产物的步骤；

所述进行偶联反应前，还包括将所述载体蛋白溶解于碳酸盐缓冲液中的步骤。

所述步骤(3)中，还包括将所述络合物进行透析的步骤。

根据所述方法制备得到的铬离子抗原也属于本发明的保护范围。

由所述铬离子抗原制备得到的抗体也属于本发明的保护范围。

所述铬离子抗原和/或所述抗体在检测铬离子中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明所提供的制备铬离子抗原的方法能够方便、快捷地获得铬离子抗原，且合成步骤简洁明了、合成成本低，效果好。用本发明方法制备的铬离子抗原进行免疫得到的抗体的特异性好、最低检测限值低。因此，本发明所提供的制备铬离子抗原的方法以及由该方法获得的铬离子抗原，将在铬离子的酶联免疫检测中有广阔的应用前景。

附图说明

图1为铬离子抗原的合成路线图。

图2为以EDTA-Cr为标准样品建立的铬离子间接ELISA法标准曲线。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。