[发明专利]重组葡激酶二聚体的制备及聚乙二醇定点修饰

权利要求书

1.一种重组葡激酶突变体，其特征在于与野生型葡激酶相比，在C-末端多了3个氨基酸，即甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸(-Gly-Gly-Cys)。

2.根据权利要求1所述的重组葡激酶突变体的制备方法，其特征在于包括如下步骤：构建重组葡激酶突变基因；突变基因与质粒连接构建表达载体；载体转化入大肠杆菌并进行高效表达；重组葡激酶蛋白的分离纯化。

3.根据权利要求2的制备方法，其特征在于所述的表达载体为pET15质粒。

4.根据权利要求2的制备方法，其特征在于所述的大肠杆菌为E.coli BL21(DE3)。

5.一种重组葡激酶二聚体的制备方法，其特征在于所用重组葡激酶为权利要求1所述的重组葡激酶突变体，并用同型双功能连接剂制备葡激酶二聚体。

6.根据权利要求5的制备方法，其特征在于所述的同型双功能连接剂为1，4-二马来酰亚胺丁烷。

7.根据权利要求5的制备方法，其特征在于所述的葡激酶二聚体是通过1，4-二马来酰亚胺丁烷的2个马来酰亚胺基团与2个葡激酶分子C-末端的半胱氨酸形成稳定的共价键。

8.一种N-末端聚乙二醇定点修饰的重组葡激酶二聚体的制备方法，其特征在于所述的葡激酶二聚体为权利要求5所述的重组葡激酶二聚体。

9.根据权利要求8的制备方法，其特征在于所述的聚乙二醇为单甲氧基聚乙二醇丙醛，分子量为2.0kDa-40.0kDa。