[发明专利]一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法

权利要求书

1.一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：

（1）样品提取：

①称取已切碎的肌肉、肾脏或肝脏样品1.0～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管，残渣中加入提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至同一离心管（合并两次提取上清液），待脱脂；

②乳样品：称取牛奶样品1～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和0.5～1.5 mL盐酸溶液，涡旋1 min后再加入20～30 mL提取液，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸过滤于另一离心管，待脱脂；

（2）提取液脱脂

向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min，去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化；

（3）固相萃取柱净化

将上步经脱脂的样品提取液转移至已活化好的HLB 固相萃取柱（甲醇、水各6mL活化），上样后先用5 mL水洗涤，弃去流出液，再用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于10 mL刻度试管中，整个固相萃取净化过程控制流速不超过2 mL/min，洗脱液在40℃水浴上用氮气吹干，残留物用标样溶解液溶解定容到1.0 mL，混匀，过0.22 μm 微孔滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定；

（4）液相色谱-质谱/质谱仪测定

按照液相色谱－质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，质谱分离采用在正离子模式下进行母离子全扫描，再对其子离子进行全扫描，通过被测样品的质谱和相关信息，得到其定性和定量结果，定性时应当与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物，定量测定时采用标准曲线法。

2.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述三氯乙酸的使用浓度为1%；所述盐酸溶液的使用浓度为6 mol/L；所述提取液为甲醇-0.1﹪甲酸水溶液体系（2：5，V/V）。

3.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述HLB固相萃取柱为Oasis ，500 mg/6 mL。

4.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（3）中所述标样溶解液为甲醇-0.1%甲酸水溶液体系（1：4，V/V）。

5.根据权利要求1所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于步骤（4）中所述液相色谱分析条件为：

色谱柱：反相C18色谱柱

流动相A：乙腈；流动相B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱

柱温：30℃ 

流速：0.5～1 mL/min

进样量：10～20 μL。

6.根据权利要求5所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于所述反相C18柱为Eclipse XDB-C₁₈分析柱（150mm×4.6 mm, 5μm）。

7.根据权利要求5所述的动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，其特征在于所述梯度洗脱的梯度变化为：

0～2分钟，流动相A10%，流动相B90%；

2～4分钟，流动相A10～60%，流动相B90～40%；

4～7分钟，流动相A60%，流动相B40%；

7.01～10分钟，流动相A10%，流动相B90%。