[发明专利]一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体地说，是一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，尤其涉及杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素等四种兽药残留量的液相色谱-质谱/质谱检测方法。 

背景技术

多肽类抗生素（peptides）是由多粘杆菌或产气孢子杆菌的培养液中提取制得。常用的多肽类抗生素有杆菌肽（Bacitracin）、多粘菌素B（Polymyxin B）、粘杆菌素（Colistin）、维吉尼霉素(Virginiamycin)等。每种多肽类抗生素都是一种含有多种组分的化合物。多肽类抗生素可分别抗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、绿脓杆菌、真菌、病毒、螺旋体、原虫的感染，对败血症、呼吸道感染、泌尿系统感染、牛乳腺炎等疾病，小剂量时抑菌，大剂量时杀菌，被广泛用于家禽、猪、牛等的饲料添加剂和兽药，用来促进动物的生长和治疗畜禽疾病。 

随着多肽类抗生素应用的增加，人们逐渐发现其在动物体内的残留，可通过肉、蛋、奶等动物源食品传递给人类。多肽类抗生素的毒性较大，除对细菌细胞膜损伤外，对动物细胞膜也起作用，主要对肾、神经系统有一定毒性。因此，多肽类抗生素在动物源产品中的残留问题给人们身体健康带来了较大的隐患，

目前，多肽类兽药残留量的检测方法主要有微生物法、免疫分析法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和液相色谱-质谱等方法。GB/T 20743-2006《猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》公开了猪组织中杆菌肽残留量的检测方法；GB/T 22981-2008《牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》公开了牛奶和奶粉中杆菌肽残留量的检测方法；SN0295-93《出口禽肉中杆菌肽残留量检验方法 杯碟法》公开了禽肉中杆菌肽残留量检测方法；SN0668-1997《出口肉及肉制品中粘菌素残留量检验方法 杯碟法》公开了肉及肉制品中粘菌素残留量检测方法； GB/T 20765-2006《猪肝脏、肾脏、肌肉组织中维吉尼霉素M1残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》公开了猪组织中维吉尼霉素M1残留量的检测方法；GB/T 22991-2008《牛奶和奶粉中维吉尼霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》公开了牛奶和奶粉中维吉尼霉素残留量的检测方法；SN/T1134-2002《进出口肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检验方法 杯碟法》公开了肉及肉制品中维吉尼霉素残留量检测方法。

上述多肽类兽药残留分析方法中，大多只限于单个抗生素残留量的检测，且前处理方法繁琐。本发明旨在利用LC-MS/MS检测技术，建立一种可同时检测动物源食品中杆菌肽A、粘杆菌素、多粘菌素B、维吉尼霉素M1等多种多肽类抗生素残留量检测和确证方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有不足问题，提供一种液相色谱/串联质谱法检测动物源食品中多种多肽类兽药残留量的方法，可方便、准确、高效地同时检测动物源食品中杆菌肽、多粘菌素B、粘杆菌素、维吉尼霉素等四种兽药残留量。 

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种动物源食品中多种多肽类兽药残留量的检测方法，包括以下步骤：

1、样品提取：

（1）称取已切碎的肌肉、肾脏或肝脏样品1.0～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠，再加入5～15mL三氯乙酸溶液和1～3mL乙腈，9 500 rpm均质 2 min后，4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸转移至另一离心管。残渣中加入提取液超声提取10 min，振荡提取10 min，4℃下8 500 rpm离心10 min，上清液经快速定量滤纸转移至同一离心管（合并两次提取上清液），待脱脂。

（2）乳样品：称取牛奶样品1～3.0 g于50mL具帽离心管中，加入适量无水硫酸钠和0.5～1.5 mL盐酸溶液，涡旋1 min后再加入20～30 mL提取液，超声提取10 min，振荡提取10 min，然后4℃下8 500 rpm离心10 min。上清液经快速定量滤纸过滤于另一离心管，待脱脂。

2、提取液脱脂

向上步所得提取上清液离心管中加入正己烷5～15mL，涡旋2 min，4℃下6 000 rpm离心5 min。去掉上层（正己烷层）液，得下层液待固相萃取柱净化。

3、固相萃取柱净化