[发明专利]检测雌激素的方法及其专用试纸

说明书

技术领域

本发明涉及检测雌激素的方法及其专用试纸。

背景技术

天然雌激素主要包括雌二醇、雌酮、雌三醇，而合成雌激素主要有己烯雌酚、双烯雌酚、己烷雌酚等，在农业中主要用作口服避孕药和家畜生长的同化激素，通过增强食欲、抑制发情、提高饲料转化率和控制性别等作用，能达到大幅度地提高动物养殖经济效益的目的，导致农产品中雌激素污染残留呈上升趋势。农产品中的雌激素可以通过扰乱内分泌、免疫、神经等系统的正常功能而对动物和人产生多种疾病，最主要表现在对生殖系统的影响：女性多出现子宫内膜异位、子宫肌瘤，卵巢癌、乳腺癌等疾病。男性多出现睾丸癌、前列腺癌、精子的数量与质量下降等症状。

外源雌激素在环境及农产品中含量很少(动物肌肉组织中类固醇激素以ng·kg^-1到μg·kg^-1数量级存在)，加上本身化学性质差异较大以及内源性雌激素的影响，因此对检测方法的灵敏度要求较高。目前用于农产品中性激素检测的方法主要包括仪器分析法、生物活性法和免疫分析法。

仪器分析法主要包括气相色谱法、高效液相色谱法以及色谱-质谱联用法，已被广泛用于雌激素类等的测定。仪器分析法灵敏度高，能较准确地定性定量，是实验室进行确证的标准方法。但该方法仪器成本较高，分析时间较长、操作较复杂，因此只适合实验室确证用，并不适合基层普查使用。

生物活性法测定是基于细胞或受体来测定具有雌激素活性样物质的。在外源细胞内表达雌激素受体，同时构建含有雌激素反应元件的荧光素报告基因系统，通过测定荧光酶的表达来测定样品中的雌激素活性物质。受体竞争法则是利用一定量的雌激素标准品与样品竞争结合一定量的受体，如果样品中的雌激素类物质多，则受体结合的雌激素标准品量就少，通过一系列酶显色反应，从而达到检测样品中雌激素类物质的目的。可以看出基于生物活性测定的方法操作仍较复杂，而且往往受到灵敏度不够的影响。

免疫分析法是利用抗原抗体特异识别的原理对目标物进行检测，因此具有灵敏度高、特异性强等优点，主要包括放射免疫分析法、酶联免疫分析法以及发光免疫分析法等。已有文献报道建立放射免疫和酶联免疫分析方法用于检测畜禽产品中雌二醇等。但免疫分析法仍然具有分析时间较长，步骤繁琐的不足，因此亟需开发一种更为快捷、灵敏、简单的性激素残留检测方法。

免疫层析技术是免疫分析与层流技术的结合，其装置包括四个基本材料成分和三个基本试剂成分：第一个材料是层析膜，膜上通常固定两种成分，一是待检物的捕获剂，二是参照剂，用来对测试进行质量控制。第二个材料通常是玻璃纤维，用来固定第三种试剂成分即标记物。将样品加到第三个材料即样品垫上面，然后发生层析作用，首先和标记物反应，然后二者沿着层析膜流动，分别与待检物和对照试剂反应，剩余的液体留到第四种材料即吸水纸上面。免疫层析技术兼具免疫分析和层流技术二者的优点，主要表现在：第一，特异性强，以抗原抗体反应为基础，保持了免疫分析的特异性；第二，快速，将原来需要几个小时的检测缩短为几分钟就可以出结果；第三，简便，不需要繁杂的操作，使用者无需培训即可使用；第四，价廉，研发、生产以及使用的成本都很低。由于免疫层析具有这些优点，目前已广泛应用于传染病诊断、生殖生育监测、药物滥用等领域。虽然免疫层析具有如此吸引人的优点，但其应用也受到了一定限制，主要是因为目前在免疫层析中应用的主要标记物是胶体金，一般通过肉眼观察进行判断结果，因此灵敏度不够高，也无法进行准确定量，只能是半定量测定。因此对环境和农产品中含量很低的雌激素测定来说，普通的胶体金免疫层析很难达到灵敏度及定量的要求。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测雌激素的试纸。

本发明所提供的检测雌激素的试纸，是如下1)或2)所述的试纸：

1)包括样品吸收垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有雌激素和载体蛋白的偶联物，质控区包被有质控抗原；

2)包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜和吸水垫，其依次连接；所述标记物垫上包被有荧光素标记的雌激素抗体和荧光素标记的质控抗体；所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有雌激素和载体蛋白的偶联物，质控区包被有质控抗原；

所述荧光素标记的雌激素抗体与所述雌激素和载体蛋白的偶联物结合。

所述检测区位于近于所述样标记物垫的末端的一侧或所述检测区位于近于所述样品吸收垫的末端的一侧，所述质控区位于近于所述吸水垫的始端的一侧；所述检测区距所述标记物垫的末端或所述样品吸收垫的末端7mm-8mm或7mm或8mm，所述质控区距所述吸水垫的始端7mm-8mm或7mm或8mm。