[发明专利]一种亚单位流感疫苗中裂解剂含量的检测方法有效
| 申请号： | 201110101101.4 | 申请日： | 2011-04-21 |
| 公开（公告）号： | CN102749408A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 田文莉;李小强;杨江山;张艳 | 申请（专利权）人： | 天士力金纳生物技术（天津）有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/88 | 分类号： | G01N30/88 |
| 代理公司： | 北京华科联合专利事务所 11130 | 代理人： | 王为 |
| 地址： | 300410 天津市北*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 单位 流感疫苗 裂解 含量 检测 方法 | ||
1.一种亚单位流感疫苗中壬苯醇醚-9的检测方法，该方法包括以下步骤：
(1)待检亚单位流感疫苗样品的处理，
(2)HPLC检测得到标准品壬苯醇醚-9的标准曲线，
(3)处理后的待检亚单位流感疫苗样品的HPLC检测，
(4)计算亚单位流感疫苗中壬苯醇醚-9的含量；
其中步骤(1)和步骤(2)之间，以及步骤(2)和步骤(3)之间的顺序可以互换；
其特征在于，HPLC检测采用的色谱柱是C4柱。
2.如权利要求1的检测方法，其特征在于HPLC检测采用的色谱柱是ThermoBioBasic-4C4柱。
3.如权利要求2的检测方法，其特征在于步骤(1)的待检亚单位流感疫苗样品的处理方法为：用4倍体积的甲醇沉淀后上清液作为待测样品。
4.如权利要求2的检测方法，其特征在于HPLC检测时的紫外检测器的波长为275nm。
5.如权利要求3或4的检测方法，其特征在于HPLC检测时采用体积比为80∶20的甲醇/水作为流动相，流速1ml/min。
6.如权利要求5的检测方法，其特征在于步骤1的沉淀温度为-20℃～65℃。
7.如权利要求6的检测方法，其特征在于步骤1的沉淀温度为37℃。
8.如权利要求7的检测方法，其特征在于HPLC检测时的柱温为22～37℃。
9.如权利要求8的检测方法，其特征在于HPLC检测时的柱温为33℃。
10.如权利要求9的检测方法，该方法包括以下步骤：
(1)待检亚单位流感疫苗样品的处理
取待检亚单位流感疫苗样品200μl，加入800μl甲醇，剧烈震荡30sec，37℃30min，14000rpm离心20min，吸取上清，0.45um滤膜过滤，得到测试液；
(2)HPLC检测得到标准品壬苯醇醚-9的标准曲线
精密称取标准品壬苯醇醚-9250μg，用体积比为4∶1的甲醇/水溶解定容至100ml，即得2500μg/ml壬苯醇醚-9溶液，依次稀释定容为1000μg/ml、50μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、5μg/ml，按样品处理方法处理后HPLC测定，以壬苯醇醚-9浓度对峰面积制作标准曲线；
(3)处理后的待检亚单位流感疫苗样品的HPLC检测
步骤1得到的测试液用和制作标准曲线的同样条件进行HPLC测定，得到色谱图；
(4)计算亚单位流感疫苗中壬苯醇醚-9的含量
其中HPLC的色谱条件为：色谱柱：Thermo BioBasic-4C4柱，4.6mm×150mm，5μm，定量环：20μl，流动相：体积比为80∶20的甲醇：水，流速：1ml/min，紫外检测器检测波长275nm，柱温：33℃，上样量：100μl。
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