[发明专利]一种手工半定量液基细胞学制片方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种适用于妇科体检、宫颈癌筛查的液基细胞学制片方法，属细胞学制片技术领域。

背景技术

液基细胞学检查是采用液基细胞学制片和染色技术检测宫颈脱落细胞并进行细胞学诊断，它是目前国际上较先进的一种宫颈癌细胞学检查技术，与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞的检出率。液基细胞学制片技术，是一种将脱落细胞保存在液体中，并通过特殊途径将细胞均匀分散贴附在载玻片上制成涂片的技术。液基细胞学制片技术诞生于1991年美国等发达国家，率先应用于妇科细胞学检查，国内从2001年开始进行液基细胞学筛查宫颈癌的研究，使该项技术得到迅速发展，为脱落细胞学诊断作出了重大贡献。

传统的液基细胞学制片技术包括有膜式过滤法薄层制片技术（TCT）、自动离心沉降法制片技术（LCT）、离心甩片法制片技术以及利普手工离心涂片技术（LPT）。这些制片技术存在设备昂贵，试剂耗材成本高、阳性率低、质量不稳定等缺陷，确实有必要加以改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种手工半定量液基细胞学制片方法，其是一种成本低廉、高效可重复、可受控的宫颈液基细胞学制片技术，以解决目前进口自动制片设备价格昂贵，配套试剂耗材成本过高，国产制片系统价格高，制片质量不稳定，以及传统手工滴片法制片粗糙的问题。

为了达成上述目的，本发明的技术方案是：

一种手工半定量液基细胞学制片方法，以液基保存的宫颈脱落细胞为标本来源，经离心处理后，进行半定量稀释，按一定量加入细胞分散剂中进行悬浮和混匀，取数滴细胞悬液滴于玻片表面，细胞自然沉降晾干后进行固定、染色，其方法是按下列步骤进行的：

步骤1，标本确认并编号：取待检标本管和申请单，分别用记号笔在标本管和申请单上标上流水号，在试管架中准备好与标本管相对应的1支标准尖底离心管（12ml）和1支圆底试管（5ml），并进行编号；

步骤2，添加细胞分散剂：分别向每个圆底试管中加入100μl的细胞分散剂（美国Synermed公司）；

步骤3，转移标本、离心：将标本瓶放在点触式混匀器上振荡3-5秒，缓缓向尖底离心管中倒入6ml左右（6ml±1ml）的标本溶液；1500转/分钟条件下离心5分钟；

步骤4，倒上清：逐个将离心管中的上清液倒出，并在滤纸上尽量吸尽管内的残余液体；

步骤5，稀释细胞沉淀：针对每个标本，观察其离心管中细胞沉淀团块的大小，按2.5±0.5倍体积加入蒸馏水进行稀释；

步骤6，转移细胞悬液：振荡3-5秒，用吸管吸取细胞悬液，向对应的圆底试管中加入2滴细胞悬液；

步骤7，滴片：再次振荡混匀3-5秒，用吸管从中吸取适量的细胞悬液，于相应载玻片正上方约5cm处，垂直滴2滴±1滴的细胞悬液至载玻片中心，完成制片。

采用上述方案后，本发明与传统液基学制片技术相比，具有以下优点：

一、本发明无需特殊的专门设备，仅需一台振荡器、一台普通离心机及少量配套试剂和耗材即可开展工作，而TCT、LCT等自动制片技术需要昂贵的制片系统（如TCT法需要膜式制片机，LCT法需要全自动制片染色一体机，离心甩片法需要涂片离心机等），因此，本发明是目前最经济的液基学制片技术，更利于在各级医院和医疗机构迅速普及和推广；

二、本发明可以实现半定量化操作，可以对涂片细胞的浓度进行准确的控制，大大减少上述传统制片方法中所制玻片细胞密度不均一、细胞数量过少或密度过大造成的细胞重叠、厚薄不一的现象，极大的改善制片的均一性、稳定性和满意度，并能显著提高细胞病理学医生或自动阅片系统的阅片效率；

三、本发明操作简便、高效，仅需离心、稀释、分散、滴片几步操作，易于迅速掌握，并具有很强的可重复性和灵活性，一份标本可以同时制成多张涂片，满足不同检测的需求，同一个标本即使不同人来进行制片，也能获得几乎完全一致的制片效果，同时，使用本发明进行制片，平均一小时可以制片30张以上，效率高于目前绝大多数的制片技术；