[发明专利]一种家蚕肠道益生菌的分离鉴定及其酶基因的克隆与表达

权利要求书

1.一种家蚕肠道益生菌酶，其特征在于，具有SEQ ID NO 3所述的氨基酸序列。

2.编码权利要求1所述家蚕肠道益生菌酶的基因，其特征在于，具有SEQ NO ID 1或SEQ NO ID 2所述碱基序列。

3.含权利要求2所述基因的表达载体。

4.由权利要求4所述表达载体转化的的宿主细胞。

5.一种家蚕肠道益生菌酶的分离方法，其特征在于，包括以下步骤，

1)随机取家蚕大造品种五龄幼虫，饥饿24h后待用；

2)将步骤1)中的蚕体浸入体积浓度75％乙醇中体表消毒后，移入无菌水中漂洗2次，无菌操作取出肠道，捣碎后移入NA液体培养基中，进行富集培养；培养条件：150r/min，28℃，48h，培养2次，将第2次富集液按10倍稀释法稀释后分别取0.2mL涂布于NA固体培养基上，于28℃培养箱中培养；

3)将经步骤2)培养出的菌落用划线法分离成单个菌落，将所得的菌种进行平板接种，于28℃培养箱中培养48h；

4)用接种针取纯化后的菌种点接在预先准备好的NA淀粉筛选培养基平板上，28℃培养箱中培养48h，加碘液染色观察，有水解现象，并且在对照NA培养基上未水解的菌株，即为筛选所得产淀粉酶菌株。

6.根据权利要求5所述的一种家蚕肠道益生菌酶的分离方法，其特征在于，所述NA培养基按如下配比：每升水中含有蛋白胨10.0g、牛肉膏5.0g、NaCl5.0g、琼脂18.0g，pH为7.2～7.4；所述NA淀粉筛选培养基是以NA培养基为基础添加质量分数1.0％的可溶性淀粉；所述LB培养基按如下配比：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g、水1L，pH 7.0。