[发明专利]干细胞筛选系统、其制备方法及干细胞的筛选方法

说明书

技术领域

本发明属于干细胞筛选技术领域，尤其涉及一种干细胞筛选系统、其制备方法及干细胞的筛选方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于人体结缔组织和器官间质中。间充质干细胞具有高分化性能，在不同的诱导条件下能分化成成熟的间质细胞，如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、网状细胞、血管内皮细胞等。作为进行组织工程研究的重要种子细胞，间充质干细胞在骨及软骨组织损伤的修复、肌肉组织退行性疾病、冠心病等疾病的治疗方面具有良好的应用前景。

现有技术公开了多种间充质干细胞的筛选方法，如密度梯度离心法、全血贴壁法、流式分选法和免疫磁珠筛选法等，其中，筛选软骨干细胞的方法主要有流式分选法、免疫磁珠筛选法和琼脂糖筛选法。琼脂糖筛选法主要包括以下步骤：将含有一定细胞量的DEME/F12培养液与等体积的2％低熔点琼脂糖充分混合，使细胞在琼脂糖筛选系统中成为单细胞状态；琼脂糖的浓度达到1％后，将筛选系统在4℃下静置10min凝固；然后加入DEME/F12培养液，于温箱中培养3周～6周；最后在倒置显微镜下提取细胞克隆团，即可得到软骨干细胞。琼脂糖筛选法不仅操作过程繁琐、筛选时间长，而且需要严格控制筛选条件，即便严格控制筛选条件，由于需要在倒置显微镜下提取细胞克隆团，在提取过程中软骨干细胞易受污染、纯度较低。

流式分选法是通过流式细胞分选仪进行干细胞筛选的方法，免疫磁珠筛选法是根据免疫学原理，利用包备有抗体的磁珠与干细胞表面的特殊标志特异结合后，通过一定强度磁场时被滞留而分选的方法，流式分选法和免疫磁珠筛选法能够简化筛选步骤，提高筛选效率，但是，由于软骨干细胞缺乏特异性的标志物，采用流式分选法和免疫磁珠筛选法进行筛选得到的干细胞纯度较低；而且流式分选法和免疫磁珠筛选法需要的细胞量大，不利于筛选组织块较小的组织。另外，流式分选法和免疫磁珠筛选法需要特定设备仪器和抗体试剂，筛选成本较高。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种干细胞筛选系统、其制备方法及干细胞的筛选方法，本发明提供的筛选方法无需特定仪器设备和抗体试剂，流程简单、操作简便，得到的干细胞纯度高。

本发明提供了一种干细胞筛选系统，包括：

固体支持物；

涂布在所述固体支持物上的纤维连接蛋白和牛血清白蛋白。

本发明还提供了一种上述技术方案所述的干细胞筛选系统的制备方法，包括以下步骤：

将纤维连接蛋白与缓冲溶液混合，得到纤维连接蛋白溶液；

将所述纤维连接蛋白溶液加入到固体支持物中进行孵育，得到涂布有纤维连接蛋白的固体支持物；

向所述涂布有纤维连接蛋白的固体支持物中加入牛血清白蛋白，得到干细胞筛选系统。

优选的，所述纤维连接蛋白溶液的浓度为5μg/mL～20μg/mL。

优选的，所述孵育的温度为0℃～5℃，所述孵育的时间为10h以上。

本发明还提供了一种干细胞的筛选方法，包括以下步骤：

a)提供软骨终板细胞重悬液；

b)将所述软骨终板细胞重悬液加入到权利要求1～5任意一项所述的干细胞筛选系统中进行孵育，得到干细胞。

优选的，所述步骤b)中，所述软骨终板细胞终浓度为200个细胞/cm²～600个细胞/cm²。

优选的，所述步骤b)中，所述孵育的温度为35℃～38℃，所述孵育的时间为5min～30min。

优选的，所述步骤a)具体包括：

a1)用胶原酶将软骨终板进行消化，离心后得到软骨终板细胞团；

a2)用DMEM/F12培养液对所述软骨终板细胞团进行重悬，得到软骨终板细胞重悬液。

优选的，还包括：

对所述干细胞进行扩大培养。

优选的，采用含有5wt％～20wt％胎牛血清的DMEM/F12培养液对所述干细胞进行扩大培养。