[发明专利]用于结构易变的试剂的无副作用微囊包封技术及水相-水相乳剂的应用

说明书

本申请是PCT国际申请日为2003年6月3日，PCT国际申请号为PCT/CN03/00431、中国国家申请号为03812857.8、发明名称为《用于结构易变的试剂的无副作用微囊包封技术及水相-水相乳剂的应用》的申请的分案申请。 

与之相关的专利申请 

本申请确认2002年6月所申报的(申请号60/384,971)美国专利优先权申请和同年10月所申报的(申请号60/418,100)美国专利优先权申请所覆盖的权利要求。上述专利优先权申请文件作为参考文献列在本申请中。本申请中我们给出了各种相关的文献，公开了其中的技术细节，以便更充分地描述本专利相关的技术状态。 

技术领域

该发明揭示了一套制备新型玻璃体颗粒体系的独特方法。这样一个颗粒体系能够有效地在制备、储存以及应用过程中保存蛋白质、多肽、DNA、脂质体和病毒颗粒等的结构和活性。 

背景技术

由于吸收性能差、体内半衰期短，大部分的蛋白质药物需要通过频繁的注射给药。为了降低这种注射的频率，1970年代以来[1]，这类药物的缓释剂型的研发吸引了本领域科学家的大量关注，至今仍是尚在攻关的课题。然而，大量的科研投入并没有取得预期的结果[2]。到目前为止，只产生了一个缓释蛋白药物剂型-重组的人类生长激素(而且还由于一系列技术问题与2004年6月被生产厂家撤出了市场)。技术久攻不破主要的障碍在于蛋白质在制剂过程和体内释放过程中的稳定性问题[3，4]以及体内的突释和不完全释放。 

在过去的几十年里，文献中见到过各种关于提高蛋白质在微囊包过程中的稳定性的方法的报道[3，5，6]。但是，这些方法只能解决一个或一部分问题，而对于其他问题不能兼顾，甚至引发出新的问题。也有些方法只适用于特定的一种蛋白质。还有一些报导也由于研究者自身所关 注的研究领域不同而显得互相矛盾。举个例子说明，对于市场上唯一同类产品--缓释重组人类成长激素(rhGH)来说，其稳定性是靠和锌形成络合物来实现的[7]。而与锌形成络合物是rhGH在体内的自然形态[8]。当这种锌络合制备方法用于另一种蛋白，如促红细胞生成素(EPO)，蛋白分子发生聚集的比率可以高达40％[9]，引起导致免疫原性的顾虑。为避免蛋白在微囊包过程中因解除有机溶剂而变性失活，科学家预先将蛋白分子与糖类、无机盐或者其他保护剂制为固体颗粒状，从而采取一种固体分散在油相，再进一步分散在水相(即油包固体-水包油，S-O-W)的方法微囊包蛋白药物[7，9，10]。这些蛋白稳定化辅料常常由于其高溶解度而产生强渗透压，引起突释[11，12]。比如，当溶解度高的硫酸盐用于提高EPO在微囊包过程中的素稳定性时，突释高达总剂量的55％[9]。 

Cleland和Jones研究了在W-O-W〔油包水-水包油〕和S-O-W微囊化过程中各种辅料对重组人类生长激素和干扰素的保护作用，发现甘露醇和海藻糖能够在防止蛋白在微胶囊过程中聚集这个方面起到最好的作用[6]。Sanchez核查了类似的赋形剂对于另一种蛋白-破伤风类酶素的保护作用，结果发现在Cleland和Jones的报告中被认定为对复原重组人类生长激素和干扰素不起有效作用的葡聚糖能在水合条件下的释放阶段对蛋白质起到最好保护功能[10]。这样的实验似乎说明了单糖在干燥过程中对蛋白能起到更好的保护作用，而多糖则在释放阶段起到更好效果[13]。不过，Sanchez的葡聚糖-PLGA复合微球缓释剂型的释放曲线显示60％的载药量发生了突释。这种突释放也许是由于直接冻干法制备的蛋白-辅料颗粒尺寸过大引起的[14，15]。