[发明专利]一种护肝益脾的药物组合物及其制备方法

权利要求书

1.一种护肝益脾的药物组合物，其特征在于，包括基质、ADH酶粉和ALDH酶粉，所述基质主要是由下列按重量份的原料制成：葛花或葛根200～260份、枳椇子100～140份、纳豆干粉20～30份。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述基质主要是由下列按重量份的原料制成：葛花或葛根240份、枳椇子120份、纳豆干粉25份。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，按重量份比，基质70～90份、ADH酶粉5～15份、ALDH酶粉5～15份。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，ADH酶粉与ALDH酶粉的重量比为1∶1。

5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，基质80份、ADH酶粉10份、ALDH酶粉10份。

6.根据权利要求1至5任一所述的药物组合物，其特征在于，和药学上可接受的载体制成胶囊剂或片剂或颗粒剂。

7.一种制备权利要求1所述的药物组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)制备基质：

101)称取葛花或葛根、枳椇子和纳豆干粉，备用；

102)将葛花或葛根、枳椇子分别洗净、烘干、粉碎，混合得混合粉，加入乙醇水溶液，于85℃～95℃回流提取4～6h，滤出提取液，残渣重新提取一次，合并滤液；滤液于85℃以下真空浓缩成浸膏；

103)将纳豆干粉加入所述浸膏，混匀，55℃以下烘干，粉碎过筛，灭菌，无菌保贮，得基质备用；

2)将基质和ADH酶粉、ALDH酶粉混合制得所述药物组合物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤102)中，乙醇水溶液的浓度为50％～70％，乙醇水溶液的体积与混合粉的体积的比值为7。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述ADH酶粉通过以下步骤制备：

201)马铃薯浸汁制备：取去皮马铃薯A克，切成小块加水5A毫升，80℃浸泡1h后，用纱布过滤，取滤出液并用水定量至5A毫升，121℃灭菌20min，即得马铃薯浸汁备用，A＞0；

202)酿酒酵母斜面培养：采用斜面培养，取100B毫升上述马铃薯浸汁，加入2B克葡萄糖，煮沸后加入2B克琼脂，继续加热使琼脂熔化后，用水定量至100B毫升，分装入试管，制成斜面；加塞，包扎，121℃灭菌20min，冷却至室温后，于无菌条件下，将菌种酿酒酵母接种在斜面上，30℃恒温培养24h；B＞0；

203)种子菌培养：取上述马铃薯浸汁，然后按每100毫升马铃薯浸汁加入2克葡萄糖，再分装至锥形瓶，加塞，包扎，121℃灭菌20min，冷却至室温后，于无菌条件下，各接一接种环步骤202)所得的斜面培养菌种，30℃恒温120r/min摇瓶培养12h；

204)液体发酵：于锥形瓶中，加入上述马铃薯浸汁，然后按每100毫升马铃薯浸汁加入2克葡萄糖，121℃灭菌20min，冷却至室温后，于无菌条件下接种10ml的种子菌培养液，30℃恒温120r/min摇瓶发酵17h；

205)发酵液经4000r/min 15min、室温的离心收集细胞或过滤收集细胞，并用蒸馏水洗净，得酵母物；

206)称取酵母物，加入0.01mol/L、pH7.0的磷酸钾缓冲液，所述磷酸钾缓冲液内含0.01mol/L巯基乙醇和1mmol/L ZnCl₂，磷酸钾缓冲液的体积与酵母物的质量的比值为5～10，搅拌提取3h～5h，4000r/min-8000r/min、室温离心10min，取上清液；残渣重复提取一次，合并上清液；

207)采用双水相萃取纯化酶液：于合并上清液中加入相对分子质量17000-24000的聚乙二醇和磷酸氢二钾萃取，聚乙二醇的质量与上清液的体积的比值为6-12％，磷酸氢二钾的质量与上清液的体积的比值为8～16％；分层后，取上层酶液，对上述缓冲液透析24h以上，其间更换缓冲液3～4次；用聚乙二醇吸水浓缩或超过滤浓缩至原体的1/3左右，得酶的浓缩液，冻干，即得ADH酶粉。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述ALDH酶粉通过以下方法制备：将绿豆洗净，包于纱布内，投入沸水中3～5min，取出，摊凉，转入搪瓷盆内摊平，加少量水，置培养箱内37～40℃催芽1～2d；待绿豆芽长至1～2cm长后，取出并用蒸馏水洗净；将绿豆芽置匀浆机中，加入预冷至5～10℃的0.01mol/LpH7.3～7.8磷酸钾缓冲液，所述磷酸钾缓冲液内含8mmol/L EDTA、0.01mol/L巯基乙醇和0.01mol/L KCl，所述磷酸钾缓冲液的体积与绿豆芽的质量的比值为5～10，匀浆，60目尼龙布过滤，滤液以4000r/min进行离心10～15min，收集上清液；于上清液中加固体硫酸铵至45％饱和度，于5～8℃低温置3～5h，离心，收集上清液；上清液对所述缓冲液透析12～24h，其间更换缓冲液2～3次；然后用聚乙二醇吸水浓缩或超过滤浓缩至原体积的1/3；冻干，得ALDH酶粉备用。