[发明专利]一种牛奶和奶粉中维生素B12的检测方法

权利要求书

1.  一种牛奶或奶粉中维生素B12的检测方法，其包括：

a、将牛奶或奶粉定容混匀得到溶解液；

b、将所述溶解液杀菌，得到灭菌液，存储所述灭菌液；

c、配制维生素B12的培养基液，将所述培养基液杀菌得到杀菌基液，存储所述杀菌基液；

d、配制不同维生素B12浓度的标准品溶液；

e、分别将所述杀菌基液、所述灭菌液、德氏乳杆菌和所述标准品溶液加入微孔板条的相应微孔中，孵育得到测试液；

f、处理所述测试液，使微生物悬浊其中，用酶标仪读取它们的混浊度；

g、绘制与所述标准品溶液相对应的所述测试液中，所述测试液中维生素B12的浓度与所述测试液混浊度的标准曲线；

h、将所述溶解液相对应的所述测试液的混浊度代入所述标准曲线中，换算得到所述牛奶或奶粉中维生素B12的浓度。

2.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤a为取所述牛奶1mL，放入50mL的离心管中用蒸馏水或纯水定容并漩涡混匀得到所述溶解液。

3.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤a为取所述奶粉1g，且放入50mL的离心管中用蒸馏水或纯水定容并漩涡混匀得到所述溶解液。

4.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤b中所述溶解液在超净台用0.2μm 或0.22μm 无菌滤膜过滤杀菌，得到所述灭菌液，将所述灭菌液存储于1.5mL或2.0mL无菌试管中。

5.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤c中加入10mL无菌水至维生素B12培养基中，盖好瓶盖，摇匀，得到所述培养基液，将所述培养基液在90-100℃水浴中加热至少5 分钟，其间振荡至少2 次，迅速冷却至室温，使用0.2μm 或0.22μm 无菌滤膜过滤杀菌所述培养基液得到所述杀菌基液，将所述杀菌基液存储于15mL无菌离心管中。

6.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤d中配制了维生素B12浓度分别为0、0.03、0.06、0.09、0.12、0.18mg/100g的所述标准品溶液，且所述标准品溶液的配制方法为加入1.8-2.2mL无菌水至维生素B12标准品瓶中得到维生素B12标准品，用移液器溶解维生素B12标准品，得到标准品浓缩液，使用所述标准品浓缩液配制得到不同浓度的所述标准品溶液。

7.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤e中取与所述标准品溶液和所述溶解液份数对应的微孔板条，分别用移液器吸取150μL所述杀菌基液至板条的全部微孔中，分别用移液器吸取150μL所述标准品溶液和所述灭菌液至指定的微孔中，分别用移液器吸取德氏乳杆菌5μL菌液至板条的微孔中，用粘合箔盖住微孔板条的微孔，在37℃±1℃黑暗条件下孵育44-48小时。

8.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤f中将所述微孔板在漩涡混合器上振荡，使微生物悬浊在所述测试液中，破坏所述测试液表面所有的泡沫，用酶标仪在610-630nm或540-550nm条件下分别读取所述测试液的混浊度。

9.  如权利要求1所述的检测方法，其中步骤h中将与所述溶解液相对应的测试液的混浊度代入标准曲线方程中得到其维生素B12浓度，将与所述溶解液相对应的测试液的维生素B12浓度换算得到所述牛奶或奶粉中维生素B12的浓度。