[发明专利]基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法

权利要求书

1.一种基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

（1）、 烟气冷凝物的制备：制备最终浓度为100 mg TPM/mL的标准储备液；

基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定：

溶液背景扣除：首先在底部整合了细胞电子传感芯片的细胞培养板（E-plate）的每个孔中加入50μL培养基，放置于细胞培养箱中的芯片读取装置上，系统自动扣除由培养基引起的阻抗信号变化背景，从而实现对细胞引起信号变化的监控；

细胞接种：取出E-plate，每孔加入100μL含有5000个CHO-K1细胞的培养基溶液，置于芯片读取装置上，通过数据分析系统显示的细胞因子（cell index，CI值）实时监测细胞的贴附与增殖状态；

染毒时间的确定：当细胞处于指数增长期时进行烟气冷凝物染毒；

DMSO溶剂浓度的优化：DMSO溶剂浓度低于0.5%；

烟气冷凝物染毒：将浓度为100mg TPM/mL的烟气冷凝物储备液用培养基稀释为一系列浓度梯度，每孔加入50μL含烟气冷凝物的培养基，使得最终染毒浓度为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL、300μg/mL，每个浓度平行6孔测定，同时设置0.3%的DMSO溶剂对照组和正常对照组（加入50μL培养基）；染毒后将E-plate置于芯片读取器上对细胞染毒后24h内的状态变化继续进行实时监控；

IC₅₀值的求出：通过不同浓度烟气冷凝物作用下的细胞生长曲线，细胞电子传感器的数据分析系统将自动绘制染毒浓度对数-响应值曲线，求出染毒24小时时该烟气冷凝物的IC₅₀值。

2.根据权利要求1所述的基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：烟气冷凝物的制备方法如下：在ISO标准条件下平衡和抽吸卷烟，烟气总粒相物（TPM）通过静电捕集管收集，利用甲醇将烟气总粒相物洗脱后在氮吹条件下将甲醇溶剂挥发掉，加入DMSO溶剂，制备最终浓度为100 mg TPM/mL的标准储备液。

3.根据权利要求1所述的基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：培养基成分是2mM L-谷氨酰胺，1.5克/升碳酸氢钠的F12K，90%；胎牛血清，10%。

4.根据权利要求1所述的基于细胞电子传感器的烟气冷凝物细胞毒性测定方法，其特征在于：细胞培养条件为温度37℃，环境为95%的空气和5%的CO₂。