[发明专利]一种花曲柳的微繁方法

权利要求书

1.一种花曲柳的微繁方法，其特征在于花曲柳的微繁方法按以下步骤实现：一、取花曲柳的种子进行消毒处理，剥离出合子胚，切取合子胚的单片子叶接种到含0.25～0.75mg/L细胞分裂素、0.5～2.0mg/L生长素、100～700mg/L的酸性水解酪蛋白、30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的诱导培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、无光照的条件下培养2～4周，得子叶形体细胞胚；

二、将子叶形体细胞胚接种到含30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的成熟培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、光照强度为20～60μmol·m^-2·s^-1、每天光照16～20h的条件下培养3～5周；

三、将经过成熟培养的子叶形体细胞胚接种到含30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的萌发培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、光照强度为20～60μmol·m^-2·s^-1、每天光照16～20h的条件下培养1～7周，得再生植株；

四、将生根并具有3片以上叶片的再生植株用清水洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为20～30℃、湿度为60％～80％、光照强度为40～100μmol·m^-2·s^-1、每天光照12～18h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，得花曲柳苗木，即完成花曲柳的微繁；

其中步骤一中诱导培养基为MS1/2培养基、MS培养基、1/2MS培养基、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤一中细胞分裂素为苄基腺嘌呤、玉米素、激动素或噻苯隆；

步骤一中生长素为2，4-二氯苯氧乙酸、萘乙酸或吲哚丁酸；

步骤二中成熟培养基为MS1/2培养基、MS培养基、1/2MS培养基、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤三中萌发培养基为MS1/2培养基、MS培养基、1/2MS培养基、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤四中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。

2.根据权利要求1所述的一种花曲柳的微繁方法，其特征在于步骤一中消毒处理的过程为：剥除包被在种子外面的果皮，流水冲洗种子20～40min，用体积浓度70％～80％的酒精浸泡种子30～120s，然后用体积浓度2％～6％的NaClO浸泡种子10～20min进行体表灭菌，再用无菌水冲洗浸泡后的种子3～7次。

3.根据权利要求1所述的一种花曲柳的微繁方法，其特征在于步骤一中在温度为25℃、湿度为50％、无光照的条件下培养2周，得子叶形体细胞胚。

4.根据权利要求1所述的一种花曲柳的微繁方法，其特征在于步骤二中在温度为25℃、湿度为60％、光照强度为40μmol·m^-2·s^-1、每天光照18h的条件下培养4周。

5.根据权利要求1所述的一种花曲柳的微繁方法，其特征在于步骤三中在温度为27℃、湿度为70％、光照强度为50μmol·m^-2·s^-1、每天光照20h的条件下培养3周，得再生植株。

6.根据权利要求1所述的一种花曲柳的微繁方法，其特征在于步骤四中在温度为25℃、湿度为80％、光照强度为70μmol·m^-2·s^-1、每天光照16h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，得花曲柳苗木。