[发明专利]一种花曲柳的微繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微繁方法。

背景技术

花曲柳(Fraxinus rhynchophylla)是木犀科白蜡树属的落叶大乔木，是我国东北东部山地的重要经济硬阔树种。花曲柳抗逆性较强且具有较强的观赏性。花曲柳木材及各种制品在国际及国内市场上供不应求，价格昂贵，具有很高的经济价值。

花曲柳用种子繁殖。目前我国尚未有花曲柳采种母树林和种子园，现有的花曲柳母树均为野生状态，且数量不多。生产和科学研究中用播种繁殖的方法培育花曲柳苗木。播种繁殖的方式存在多种缺点：1、实生苗生长周期长，成型慢(树木幼龄期长，需要6-8年才结实)；2、采种母树不足，种子数量没有保障(成年后母树具有明显的结实间隔期，间隔期为1-3年)；3、种子收集困难(花曲柳为高大乔木，树高达15米)，种子质量没有保障(种子常有虫害)；4、种子繁殖易产生变异，后代的遗传性状经常不能和母本保持一致，存在苗木长势不齐等问题。因此很难在短时间内繁殖出大量、优质的苗木以满足造林生产实践对花曲柳优质苗木的需求。

发明内容

本发明的目的是为了解决花曲柳苗木繁殖中繁殖周期长、增殖效率低、后代遗传稳定性差的问题，而提供的一种花曲柳的微繁方法。

花曲柳的微繁方法按以下步骤实现：一、取花曲柳的种子进行消毒处理，剥离出合子胚，切取合子胚的单片子叶接种到含0.25～0.75mg/L细胞分裂素、0.5～2.0mg/L生长素、100～700mg/L的酸性水解酪蛋白、30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的诱导培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、无光照的条件下培养2～4周，得子叶形体细胞胚；

二、将子叶形体细胞胚接种到含30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的成熟培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、光照强度为20～60μmol·m^-2·s^-1、每天光照16～20h的条件下培养3～5周；

三、将经过成熟培养的子叶形体细胞胚接种到含30～100g/L蔗糖和5～7g/L琼脂的萌发培养基上，在温度为20～30℃、湿度为40％～70％、光照强度为20～60μmol·m^-2·s^-1、每天光照16～20h的条件下培养1～7周，得再生植株；

四、将生根并具有3片以上叶片的再生植株用清水洗净根系附着的培养基，再移植到栽培基质中并浇透水，在温度为20～30℃、湿度为60％～80％、光照强度为40～80μmol·m^-2·s^-1、每天光照12～18h的条件下用塑料薄膜覆盖容器口培养至新叶完全展开后，去掉覆盖的塑料薄膜，得花曲柳苗木，即完成花曲柳的微繁；

其中步骤一中诱导培养基为MS1/2培养基(MS培养基中所有成分浓度减半)、MS培养基、1/2MS培养基(MS培养基中大量元素浓度减半)、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤一中细胞分裂素为苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)、激动素(KT)或噻苯隆(TDZ)；

步骤一中生长素为2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)或吲哚丁酸(IBA)；

步骤二中成熟培养基为MS1/2培养基(MS培养基中所有成分浓度减半)、MS培养基、1/2MS培养基(MS培养基中大量元素浓度减半)、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤三中萌发培养基为MS1/2培养基(MS培养基中所有成分浓度减半)、MS培养基、1/2MS培养基(MS培养基中大量元素浓度减半)、DKW培养基或WPM培养基，pH值均为5～6；

步骤四中栽培基质按体积份数比由5份的草炭土、4份的蛭石和1份的珍珠岩组成。

本发明花曲柳的微繁(即体细胞胚发生途径的植株再生)，可诱导出同时具有幼根、幼芽的双极性结构——体细胞胚，体细胞胚可直接萌发形成完整的再生植株，比分别诱导出不定芽、不定根的器官发生方式具有遗传稳定、繁殖周期短、再生频率高的特点，更有利于实现苗木的自动化生产。本发明中的技术方法苗木繁殖周期短、繁殖速度快(培养60～70天即可得到完整的再生植株)，增殖效率高(每1个外植体，即合子胚的单片子叶，可以产生15～20个体细胞胚)，体细胞胚萌发率高达87％～89.55％，再生植株移栽成活率达75％～80％。本发明可以实现缩短繁殖周期、提高繁殖效率的目标，而且本发明可大量生产与母本具有相同优良性状的再生植株。

具体实施方式