[发明专利]JAK2基因的外显子12中的突变的检测方法、以及用于所述检测方法的核酸探针和试剂盒

权利要求书

1.多态性检测用探针，该探针用于检测JAK2 外显子12基因的多态性，其特征在于，由下列（ａ）-（ｃ）中至少一种寡核苷酸构成：

（ａ）由与包含序列编号1中示出的碱基序列中碱基编号114至132的19～50个碱基长度的碱基序列互补的序列相同的序列构成的寡核苷酸，

（ｂ）由与包含序列编号1中示出的碱基序列中碱基编号122至143的22～50个碱基长度的碱基序列互补的序列相同的序列构成的寡核苷酸，和

（ｃ）由与包含序列编号11中示出的碱基序列中碱基编号41至50的10～50个碱基长度的碱基序列相同的序列构成的寡核苷酸。

2.权利要求1所述的多态性检测用探针，其中：

所述（ａ）中示出的寡核苷酸在从3’末端计数第1-3位置处具有用荧光染料标记的对应于碱基编号114的碱基，

所述（b）中示出的寡核苷酸在从5’末端计数第1-3位置处具有用荧光染料标记的对应于碱基编号143的碱基，

所述（c）中示出的寡核苷酸在从3’末端计数第1-3位置处具有用荧光染料标记的对应于碱基编号50的碱基。

3.利要求1或2所述的多态性检测用探针，其中所述（ａ）中示出的寡核苷酸在3’末端具有用荧光染料标记的对应于碱基编号114的碱基，

所述（b）中示出的寡核苷酸在5’末端具有对应于碱基编号143的碱基，以及

所述（c）中示出的寡核苷酸在3’末端具有对应于碱基编号50的碱基。

4.权利要求1～3中任一项所述的多态性检测用探针，其中与未与目标序列杂交时相比，所述寡核苷酸在与目标序列杂交时荧光强度减少或增加。

5.权利要求4所述的多态性检测用探针，其中所述寡核苷酸在与目标序列杂交时荧光强度减少。

6.权利要求1～5中任一项所述的探针，其中所述（ａ）中示出的寡核苷酸为24～30个碱基长度、所述（ｂ）中示出的寡核苷酸为29～35个碱基长度、和／或所述（ｃ）中示出的寡核苷酸为16～22个碱基长度。

7.权利要求1～5中任一项所述的探针，其中所述（ａ）中示出的寡核苷酸由序列编号6中示出的碱基序列组成、所述（ｂ）中示出的寡核苷酸由序列编号5中示出的碱基序列组成、和／或所述（ｃ）中示出的寡核苷酸由序列编号4中示出的碱基序列组成。

8.权利要求1～7中任一项所述的探针，其中JAK2 外显子12基因的多态性为选自K539L(sub1)、H538QK539L(sub2)、N542-E543del(del6)和F537-K539delinsL(del6inL)的至少一种突变。

9.一种检测突变的方法，其针对具有JAK2 外显子12基因的多态性部位的核酸，应用以荧光染料标记的核酸探针，通过测定荧光染料的荧光进行解链曲线分析，基于解链曲线分析的结果检测突变，其中所述核酸探针是权利要求1～8中任一项所述的核酸探针。

10.权利要求9所述的方法，其包括：扩增样品所含的核酸中包含多态性部位的区域，得到具有多态性的核酸。

11.权利要求10所述的方法，其中通过应用DNA聚合酶的方法进行扩增。

12.权利要求11所述的方法，其中在核酸探针存在的条件下进行扩增。

13.用于检测JAK2 外显子12基因的多态性的试剂盒，其包含权利要求1～8中任一项所述的多态性检测用探针。

14.权利要求13所述的试剂盒，其进一步包含引物，所述引物用于通过利用DNA聚合酶的方法扩增含有JAK2 外显子12基因的多态性部位的区域。