[发明专利]一种从葡萄皮红中分离纯化锦葵花素葡萄糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物提取领域，特别是一种从葡萄皮红中分离纯化高纯度锦葵花素葡萄糖苷的方法。

背景技术

葡萄皮红是将制造葡萄汁或葡萄酒后的残渣除去种子及杂物，经浸提、过滤、浓缩等精制而得，属于花色苷类色素。花色苷属于类黄酮类物质，具有抗炎症，提高免疫力，抗氧化，消除自由基，改善肝脏以及血清中的脂质，防止动脉硬化，提高视力等功能。

锦葵花素葡萄糖苷(malvidin-3-O-glucoside)是以黄酮为母核的类黄酮类成分，其结构式如下：

该化合物极性大，水溶性好，易溶于甲醇和乙醇中，不溶于氯仿和乙醚等非极性溶剂中。

类风湿性关节炎是一种常见的关节炎，在其发病中有多种促炎性细胞因子的参与，如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1L-1、1L-6、1L-15等。通过抑制促炎性细胞因子的产生或阻断气作用，可改善关节炎症反应。此外，现代研究认为，一氧化氮的过度合成也是类风湿性关节炎发病机制的重要因素之一。研究证明，锦葵花素葡萄糖苷能抑制TNF-α活性和一氧化氮合成酶的表达，从而治疗、预防或改善类风湿性关节炎，将其制成不同的剂型可用于口服、外用和皮内注射。

目前，已报道的分离提纯锦葵花素葡萄糖苷的方法主要有纸色谱、柱色谱和制备色谱。Le Traon-Masson M P.等将葡萄皮甲醇提取物过聚酰胺(Polyclar AT)层析柱，先用水将糖、单宁和酚酸洗脱掉，再用体积比为CH₃OH∶H₂O∶HCl＝70∶30∶1的混合液洗脱，然后经过反复分离、浓缩和冷冻干燥得到42％的锦葵花素葡萄糖苷。Spagna G.和Piffer P.G.将葡萄酒色素用无水甲醇提取后上SE 52纤维阳离子交换层析柱，然后分别用0.02mol/l的盐酸，含0.2mol/l盐酸的80％乙醇-水溶液、45％乙醇-水溶液和甲醇进行洗脱。洗脱液通过TLC分析和HPLC检测，收集浓缩后得到48％的锦葵花素葡萄糖苷。Tatsuzawa F.等将20g野凤仙花用5％醋酸水溶液提取后，提取物分别经Diaion HP-20大孔吸附树脂柱层析(5％醋酸-甲醇洗脱)、纸层析(BAW洗脱)、薄层层析(15％醋酸洗脱)、制备色谱和Diaion HP-20大孔吸附树脂柱层析，分离纯化得到锦葵花素葡萄糖苷5mg。

由于纸色谱只用于半定量分析，不能制得纯度较高的产品，应用范围有限。加上其载样量少，不适合大规模分离提纯。制备色谱的填料用量大且价格昂贵，造成生产成本太高。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种从葡萄皮红中分离纯化锦葵花素葡萄糖苷的方法。

本发明的技术方案如下：

一种从葡萄皮红中分离纯化锦葵花素葡萄糖苷的方法，其步骤如下：

1)将葡萄皮红用水溶解后上径高比为1∶8～1∶10大孔吸附树脂层析柱，用pH值为2～5的水和/或醇溶液梯度洗脱，洗脱液通过液相检测，收集富含锦葵花素葡萄糖苷的组分，加热减压浓缩，得粗品I；

2)多次大孔吸附树脂柱层析得到的粗品I合并后过质量比为1∶1～1∶3活性炭和硅藻土混合层析柱，用氯仿和/或乙醇溶液洗脱，将洗脱液加热减压浓缩，得粗晶II；

3)粗品II用乙醇按1g∶5～15ml的比例溶解后加入80-100目聚酰胺混合搅拌均匀，用旋转蒸发仪浓缩干后得拌样聚酰胺，粗品II与聚酰胺的质量比为0.5～2.0∶1；层析柱中依次加入聚酰胺和拌样聚酰胺，采用干法装柱；干法装柱的径高比为1∶3～1∶8，聚酰胺与拌样聚酰胺的高度比为3～8；用乙醇水溶液梯度洗脱，洗脱液分批收集，通过液相检测结果，合并含量相近的组分，将其减压浓缩后，用上述方法再过3～5次聚酰胺层析柱，得到锦葵花素葡萄糖苷含量为95％的精品；

4)精品通过乙醇-丁酮重反复结晶，得到含量98％以上的锦葵花素葡萄糖苷。

所述步骤1)中所述的大孔吸附树脂的型号为D101、D201、Diaion HP-20、NKA-II、HPD100、AB-8、X-5或S8之一。

所述步骤1)中所述的醇为甲醇、乙醇或丙醇之一。

所述步骤1)中所述的水和/或醇混合溶剂中醇的体积百分比浓度为0～100％。

所述步骤2)中所述的氯仿和乙醇混合溶剂中乙醇的体积百分比浓度为0～100％。

所述步骤3)中所述的洗脱剂水和/或醇溶液中醇为甲醇、乙醇或丙醇之一。