[发明专利]一种乌贼墨肽聚糖的制备方法和应用

权利要求书

1.一种乌贼墨肽聚糖的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)取新鲜乌贼墨匀浆，用丙酮脱脂；

2)加入2～5倍体积的0.08～0.12M浓度的Tris-Hcl缓冲液在3-5℃下浸泡8～24h进行提取，离心后超滤，或者多次上述重复提取、离心后，然后合并、超滤；再乙醇沉淀和sevag试剂除蛋白，旋转蒸发，冷冻干燥；

3)采用DEAE-52离子交换层析柱分离，将步骤2)中的冷冻干燥物分别用Tris-Hcl缓冲液，NaCL溶液0.1mol/L～1mol/L进行梯度洗脱，紫外280nm检测吸光度，同时采用苯酚-硫酸法检测糖峰，收集峰值洗脱液，在490nm处检测糖峰，收集最佳峰的洗脱液，透析除盐，冷冻干燥；

4)采用Sephadex G-75凝胶柱色谱分离纯化，于280nm处检测，收集洗脱液，冷冻干燥；

5)将步骤③所得样品进行纯度检测，通过高效液相和SDS-PAGE凝胶电泳。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤1中的丙酮脱脂为在匀浆液中加入2～4倍体积的丙酮于-15～-25℃中进行脱脂。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的sevag试剂的配比为氯仿与正丁醇的体积比例3∶1。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的梯度洗脱的洗脱速度1ml～1.5ml/min，每管4～6mlml。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤4)所述的Sephadex G-75凝胶柱色谱分离的步骤为：将步骤②所得样品溶于蒸馏水，过G-75凝胶柱，洗脱速度0.8ml～1.5ml/min，与280nm处检测，收集洗脱液，冷冻干燥。

6.一种根据权利要求1至5任一权利要求所述的制备方法所制备的乌贼墨肽聚糖在人前列腺癌上的应用。

7.一种根据权利要求1至5任一权利要求所述的制备方法所制备的乌贼墨肽聚糖在抗前列腺癌DU-145细胞抑制增殖上的应用。

8.一种根据权利要求1至5任一权利要求所述的制备方法所制备的乌贼墨肽聚糖在抗前列腺癌PC-3细胞抑制增殖上的应用。