[发明专利]一种测定小浆果ORAC的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种适用于小浆果总抗氧化能力测定的ORAC检测试剂盒，由以下成分组成：

1)Trolox存储液    40mM

2)荧光素钠存储液  40μM

3)AAPH溶液        60mM

4)pH7.4磷酸缓冲液 75mM

5)荧光微孔反应板  黑底96孔板

6)包装盒           一个塑料或硬纸等材料做成的盒子

2.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：所用抗氧化标准物质为Trolox(6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchromate-2-carboxylic acid，6-羟基-2，5，7，8-四甲基铬酸盐-2-羧酸)，一种抗氧化剂维生素E水溶性类似物，存储浓度为40mM。

3.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：所用荧光物质为荧光素钠(Fluorescein disodium，disodium 2-(3-oxo-6-oxidoxanthen-9-yl)benzoate，水合荧光胺二钠盐)，存储浓度为40μM，棕色瓶避光保存。

4.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：所用自由基产生剂为AAPH(2，2′-azobis(2-methylpropionamide)-dihydrochloride，2，2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐)，一种偶氮类化合物，浓度为60mM。

5.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：所用缓冲液为75mM的pH7.4磷酸缓冲液，所有存储试剂与样品的稀释均用此缓冲液。

6.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：反应在荧光微孔板，即黑底96孔板中进行，以荧光微孔板分析仪读取数据，分析结果。

7.根据权利要求1所述一种小浆果ORAC检测试剂盒，其特征在于：所用包装盒为一个塑料或硬纸等材料做成的盒子，整个小浆果ORAC检测试剂盒2-8℃保存。

8.一种小浆果总抗氧化能力ORAC检测方法，包括了以下步骤：

1)小浆果样品前处理：小浆果样品采用醇提取法处理，提取液用试剂盒提供的缓冲液稀释适当倍数得到样品液。

2)用试剂盒的试剂进行检测：将样品液或Trolox标准品液与荧光素钠试剂混合，37℃反应15分钟后，加入AAPH溶液，立即测定荧光强度。

3)分析检测结果：采用抗氧化样品作用下的荧光衰退曲线下面积与荧光自然衰退曲线下面积的差，作为衡量抗氧化样品的抗氧化能力指标，以Trolox为定量标准，从而测算出小浆果总抗氧化能力大小。

9.根据权利要求8所述小浆果总抗氧化能力ORAC检测方法，其特征在于：所用小浆果样品的醇提取液，为准确称量的5克小浆果样品，加入50毫升的80％甲醇(或70％乙醇)，匀浆机搅匀，37℃摇床120rpm提取24小时，3000rpm离心过滤，4℃保存的提取液；所用测试的样品液，为用试剂盒提供的缓冲液二倍稀释法配置的1、0.5、0.25、0.125当量梯度样品溶液；所用Trolox标准品液，为用试剂盒提供的缓冲液稀释配置成的0、2、4、8、12、16μM标准品梯度溶液；所用荧光素钠试剂，为用试剂盒提供的缓冲液稀释成的0.4μM反应液；所用空白对照，为试剂盒提供的磷酸缓冲液。

10.根据权利要求8所述小浆果总抗氧化能力ORAC检测方法，其特征在于：100μL样品与50μL荧光素钠混合均匀，反应温度控制在37℃，反应时间控制在15分钟；加入50μL的AAPH溶液需快速准确，宜用八道或十二道的多孔道移液器加样，整个反应体系200μL在黑底的96孔板内进行；荧光强度由荧光微孔板分析仪读取，在加入AAPH溶液后立即测定，荧光检测范围为激发波长485nm、发射波长538nm，测定温度控制在37℃，测定时间持续100分钟，依次测定每个加样微孔，隔一分钟测定一次。