[发明专利]一种测定小浆果ORAC的检测试剂盒及其检测方法

说明书

一、技术领域

本发明为一种测定小浆果总抗氧化能力的方法，提供了一种适用于小浆果总抗氧化能力测定的ORAC检测试剂盒及其检测方法，属于活性检验测定技术领域。

二、背景技术

小浆果，包括草莓、蓝莓、树莓、黑莓等，以其独特的风味及营养保健价值风靡世界，是“超级水果”。小浆果富含维生素和花青素等多酚类活性物质成分，具有抗氧化清除氧自由基的功能，是集营养保健于一身的第三代保健果品。研究证明老化和多种疾病与氧自由基有关，因此与健康关系密切的食品，包括小浆果的抗氧化能力测定，引起了人们广泛关注。

ORAC(Oxgen Radical Absorbance Capacity)指氧自由基吸收能力，ORAC分析方法利用荧光强度检测的高灵敏性，根据自由基破坏荧光探针，使荧光强度产生变化原理，以偶氮类化合物AAPH为自由基来源，采用抗氧化剂作用下的荧光衰退曲线下面积与荧光自然衰退曲线下面积的差，作为衡量抗氧化剂的抗氧化能力指标，结果以抗氧化剂维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准，使用荧光微孔板分析仪进行分析。ORAC分析方法受到美国农业部(USDA)、美国国立卫生院(NIH)、美国宇航局(NASA)及美国哈佛大学(Harvard University)等众多科技研究机构的认可。同时在产品研发、生产、销售的工业领域中，ORAC分析方法作为衡量产品抗氧化能力的标准分析方法已受到业内的广泛认同，并成为各进出口企业实行国际标准化质量控制的依据。ORAC值成为食品中抗氧化物含量的国际通用标准单位，国际市场上热销的“超级水果”产品都标注了ORAC值。

我国抗氧化能力测试研究方法很多，不同的方法评价标准不一致，有些针对亲水过氧基，有些针对亲脂过氧基进行分析。我们所用ORAC分析方法是测试全套总抗氧化能力的高效快速方法，相对其他抗氧化分析方法，ORAC可针对亲水过氧基、亲脂过氧基、氢氧基、过氧亚硝基和单线态氧五种自由基进行分析，提供全套总抗氧化能力测试，解决了动力学滞后时间测量问题，保证结果的稳定准确，可重复性强，并且可以大大减少测定所用样品量，使用微孔板测定实现高通量的衡量检测。ORAC分析方法的研究在国内还处于起步阶段，针对小浆果的总抗氧化能力也没有一个标准测定方法和统一的评价依据，本发明提供了一种适用于小浆果总抗氧化能力测定的ORAC检测试剂盒及其检测方法，以Trolox为定量标准，用国际通用的ORAC值来评价小浆果总抗氧化能力，便于推广应用。

三、发明内容

技术问题本发明主要是提供一种适用于小浆果总抗氧化能力测定的ORAC检测试剂盒及其检测方法。

技术方案本发明主要是提供一种适用于小浆果总抗氧化能力测定的ORAC检测试剂盒，由以下成分组成：

ORAC检测试剂盒所用抗氧化标准物质为一种抗氧化剂维生素E水溶性类似物Trolox(6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchromate-2-carboxylic acid，6-羟基-2，5，7，8-四甲基铬酸盐-2-羧酸)，存储浓度为40mM；所用荧光物质为荧光素钠(Fluorescein disodium，disodium2-(3-oxo-6-oxidoxanthen-9-yl)benzoate，水合荧光胺二钠盐)，存储浓度为40μM，棕色瓶避光保存；所用自由基产生剂为AAPH(2，2′-azobis(2-methylpropionamide)-dihydrochloride，2，2′-偶氮二异丁基脒二盐酸盐)，一种偶氮类化合物，浓度为60mM；所用缓冲液为75mM的pH7.4磷酸缓冲液，所有存储试剂与样品的稀释均用此缓冲液。

反应在荧光微孔板，即黑底96孔板中进行，以荧光微孔板分析仪读取数据，分析结果；所用包装盒为一个塑料或硬纸等材料做成的盒子，整个小浆果ORAC检测试剂盒2-8℃保存。

一种小浆果总抗氧化能力ORAC检测方法，包括了以下步骤：

1)小浆果样品前处理：小浆果样品采用醇提取法处理，提取液用试剂盒提供的缓冲液稀释适当倍数得到样品液。

2)用试剂盒的试剂进行检测：将样品液或Trolox标准品液与荧光素钠试剂混合，37℃反应15分钟后，加入AAPH溶液，立即测定荧光强度。

3)分析检测结果：采用抗氧化样品作用下的荧光衰退曲线下面积与荧光自然衰退曲线下面积的差，作为衡量抗氧化样品的抗氧化能力指标，以Trolox为定量标准，从而测算出小浆果总抗氧化能力大小。