[发明专利]CCR5缺失型的造血干细胞及其制备方法与应用在审
| 申请号： | 201110115680.8 | 申请日： | 2011-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN102234628A | 公开（公告）日： | 2011-11-09 |
| 发明（设计）人： | 陈小平;姚永超;秦莉;那顺巴雅尔;赵思婷;覃丽梅;何正祥 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院;呼吸疾病国家重点实验室 |
| 主分类号： | C12N5/074 | 分类号： | C12N5/074;C12N15/63;C12N15/09;A61K35/12;A61P31/18 |
| 代理公司： | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人： | 刘孟斌 |
| 地址： | 510530 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | ccr5 缺失 造血 干细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种制备造血干细胞的方法，其特征在于，所述的制备方法包括如下步骤：
(1)构建CCR5特异性锌指核酸酶表达载体；
(2)构建同源重组供体质粒；
(3)对人多潜能干细胞中的CCR5基因进行敲除，并采用绿色荧光蛋白和嘌呤霉素进行筛选阳性细胞的筛选，得到CCR5基因敲除的人多潜能干细胞；
(4)诱导CCR5基因敲除的人诱导多潜能干细胞进行分化，得到CCR5基因敲除型造血干细胞。
2.根据权利要求1所述的制备自体CCR5缺失的造血干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤(1)的CCR5特异性锌指核酸酶表达载体，其表达一对锌指核酸酶，并在该对锌指核酸酶之间通过2A序列连接。
3.根据权利要求1所述的制备自体CCR5缺失的造血干细胞的方法，其特征在于，所述的步骤(1)的CCR5特异性锌指核酸酶表达的载体具有控制CCR5特异性锌指核酸酶表达的启动子，包括CAG启动子或EF1-α启动子。
4.根据权利要求1所述的制备自体CCR5缺失的造血干细胞的方法，其特征在于，步骤(2)所述的同源重组供体质粒，其筛选标记的两端为CCR5的同源臂。
5.根据权利要求1所述的制备自体CCR5缺失的造血干细胞的方法，其特征在于，步骤(4)使用OP9小鼠骨髓基质细胞共培养诱导分化步骤(3)获得的CCR5基因敲除的人多潜能干细胞。
6.根据权利要求1所述的制备方法获得的造血干细胞，其特征在于，所述的造血干细胞其自体CCR5缺失，并具有绿色荧光蛋白和嘌呤霉素抗性。
7.根据权利要求6所述的造血干细胞在治疗艾滋病的应用。
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