[发明专利]抗淋巴囊肿病毒27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种单克隆抗体及其制备方法，具体涉及一种抗淋巴囊肿病毒（lymphocystis disease virus，LCDV）27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体及其制备方法，属于分子免疫学和病毒学交叉技术领域。

背景技术

LCDV是一种具有囊膜的双链 DNA 病毒，属于虹彩病毒科（Iridoviridae）。该病毒在世界范围内可感染至少42科140种以上的海水、咸水和半咸水鱼类，造成野生、养殖及观赏鱼类的淋巴囊肿病。国内外已有的研究涉及LCDV的流行病学、病理学、分子生物学等方面，探明LCDV感染的分子机理、寻找预防和控制LCDV感染的有效方法和措施是目前研究的热点。病毒囊膜蛋白与宿主特异性细胞受体相结合，继而侵入并感染细胞是病毒感染宿主的主要途径，因此，研究LCDV宿主细胞上的病毒特异性受体蛋白，对研究LCDV感染的机理和寻找阻断LCDV感染的途径具有重要意义。我们之前的研究表明牙鲆鳃细胞（flounder gill，FG）表面分子量为27.8kDa蛋白是LCDV的受体蛋白之一，但该受体蛋白在LCDV感染中的作用与功能以及能否利用受体单抗阻断LCDV入侵尚未见报道。因此，制备LCDV受体蛋白的单克隆抗体，可以为弄清LCDV与宿主细胞相互作用关系及其感染机理提供重要工具，为寻找阻断LCDV感染的途径提供技术手段，对养殖鱼类淋巴囊肿病毒病的防治具有重要的理论与实践意义，也为制备LCDV亚单位疫苗及基因工程疫苗提供理论依据和技术基础。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种由杂交瘤细胞分泌的抗LCDV 27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体；本发明的另一个目的是提供一种抗LCDV 27.8kDa受体蛋白单克隆抗体的制备方法。

本发明的目的是由以下技术方案实现的：一种抗LCDV 27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞ALR，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC C201128，保藏日期为：2011年4月25日的杂交瘤细胞分泌的。与所述的单克隆抗体发生特异性结合的抗原决定簇位于FG细胞表面的LCDV 27.8kDa受体蛋白上。

在倒置显微镜下观察，生长状态良好的该杂交瘤细胞ALR，其外观饱满、浑圆、折光性强、细胞大小均一、贴壁良好；该杂交瘤细胞有无限分裂增殖能力；长势良好的该杂交瘤细胞常规培养2-3天，其培养基由桃红色转变为黄色，其中含有该杂交瘤细胞分泌的抗LCDV 27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体。

一种所述抗LCDV 27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：培养并收集FG细胞，经细胞裂解及差速离心得到FG细胞膜蛋白，利用电泳切胶回收提纯LCDV 27.8kDa受体蛋白，以其为抗原免疫Balb/c小白鼠，采用细胞融合制备杂交瘤细胞，经过免疫学检测筛选方法，筛选出分泌抗LCDV 27.8kDa受体蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞ALR，收集杂交瘤细胞株ALR培养上清液，经纯化后即得到抗LCDV 27.8kDa受体蛋白单克隆抗体（单抗G），并采用该受体蛋白单克隆抗体的免疫学鉴定方法鉴定27.8kDa受体蛋白。

所述的免疫学检测筛选方法是间接酶联免疫法和转印免疫印迹法。利用间接酶联免疫吸附法与转印免疫印迹法确定该单抗G能与FG细胞上的LCDV 27.8kDa受体蛋白结合。

所述的免疫学鉴定方法是间接免疫荧光法、胶体金标记免疫电镜法、阻断酶联免疫吸附法和活细胞感染阻断实验。间接免疫荧光法、胶体金标记免疫电镜法证实27.8kDa受体蛋白位于FG细胞膜上；阻断酶联免疫吸附法与活细胞感染阻断实验证明该单抗G可封闭FG细胞上LCDV的 27.8kDa受体，阻断LCDV的入侵。