[发明专利]肠球菌的快速检测方法及检测引物组和检测试剂盒

权利要求书

1.一种肠球菌的检测引物组，其特征是：其外引物外引物的上游引物具有如SEQ No.1所示的序列，其外引物的下游引物具有如SEQ No.2所示的序列；其内引物的上游引物具有如SEQ No.3所示的序列，其内引物的下游引物具有如SEQ No.4所示的序列。

2.一种使用权利要求1的引物组对肠球菌进行快速检测的方法，其特征是：利用所述引物组对待测样品的DNA进行LAMP反应，反应结束后对反应液进行阴阳性判定。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征是：所述LAMP反应按以下第一种方案或第二种方案进行：

第一种方案：所述LAMP反应在59.5-62.5℃下反应50-70min；

第二种方案：所述LAMP反应包含以下步骤：

（1）先在59.5-62.5℃下反应50-70min；

（2）后在80℃下反应6-12min。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征是：在进行所述LAMP反应的反应液中，包含浓度均为0.15-0.25μM的所述外引物的上游引物和下游引物、浓度均为0.6-1.0μM的所述内引物的上游引物和下游引物，浓度为0.6-0.7 M的甜菜碱，浓度为4.0-5.6mM的Mg²⁺，10 %（体积）的10×BstDNA聚合酶缓冲液，浓度为0.2-0.4U/μL的BstDNA聚合酶，各浓度为0.6-1.0mM的三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸。

5.一种使用权利要求1的引物组的快速检测试剂盒，其特征在于：包括三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸的混合溶液、以及所述引物组、阳性对照品、BstDNA聚合酶、10×BstDNA聚合酶缓冲液、Mg²⁺、甜菜碱溶液和无菌超纯水，所述三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸的摩尔比为1:1:1:1，所述阳性对照品为肠球菌的基因组DNA。

6.一种使用权利要求1的引物组的快速检测试剂盒，其特征在于：包含2×LAMP反应液，在所述2×LAMP反应液中包含有所述引物组、BstDNA聚合酶、2×BstDNA聚合酶缓冲液、Mg²⁺、甜菜碱溶液、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和无菌超纯水的混合液，所述外引物的上游引物和下游引物的度均为0.3-0.5μM，所述内引物的上游引物和下游引物的浓度均为1.2-2.0μM，甜菜碱的浓度为1.2-1.4 M，Mg²⁺的浓度为8.0-11.2mM，BstDNA聚合酶的浓度为0.4-0.8U/μL，三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸的浓度各为1.2-2.0mM。