[发明专利]一种产胆盐水解酶的乳酸菌及其筛选方法和应用

权利要求书

1.一种产胆盐水解酶乳酸菌的筛选方法，步骤如下：

1)定性筛选：将乳酸菌菌体洗涤重悬，破碎菌体收集上清液，将上清液点到含有胆盐的MRS固体培养基平板上，以不加胆盐的MRS固体平板做对照，37℃厌氧培养48小时左右；

2)定量筛选：将乳酸菌细胞破壁上清液与10mM甘氨脱氧胆酸钠或5g/L牛磺脱氧胆酸钠在缓冲液中混合，37℃水浴反应30min，然后用茚三酮显色液测定上述反应产生的甘氨酸或牛磺酸的量。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1)中所述含有胆盐的MRS固体培养基为MRS固体培养基中分别加入0.3g/L～0.5g/L氯化钙和3g/L～5g/L牛磺脱氧胆酸钠、0.3g/L～0.5g/L氯化钙和2mM～5mM甘氨脱氧胆酸钠。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，MRS固体培养基中分别加入0.37g/L氯化钙和5g/L牛磺脱氧胆酸钠、0.37g/L氯化钙和5mM甘氨脱氧胆酸钠。

4.根据权利要求1-3任一所述方法，其特征在于，所述MRS培养基组成如下：葡萄糖20g L^-1，蛋白胨10g L^-1，牛肉膏10g L^-1，酵母浸出汁5g L^-1，无水乙酸钠5g L^-1，磷酸二氢钾2g L^-1，柠檬酸氢二铵2g L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.58g L^-1，MnSO₄·4H₂O 0.25g L^-1，Tween 801mL L^-1，pH 6.5。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，破碎过程缓冲液为0.1M磷酸钠pH 7.0缓冲液，破碎菌体的仪器为超声波细胞破碎仪，破碎时间20min、工作时间2∶3、振幅为20％。

6.一种应用权利要求1方法筛选得到的乳酸菌，于2011年4月9日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2011116，其分类学命名：植物乳杆菌BBE7(Lactobacillus plantarum BBE7)。

7.一种权利要求5所述菌株在胆固醇清除中的应用。