[发明专利]一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法及其开放式发酵方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法，其特征是，包括下述步骤：

a枯草芽孢杆菌种子培养基的制备：以三角瓶盛装不高于总容量20％的适于细菌生长的培养基，121℃高压灭菌30分钟，冷却至室温；

b枯草芽孢杆菌种子培养基的发酵：将斜面保存的枯草芽孢杆菌菌种，接种至所述步骤a制备的枯草芽孢杆菌种子培养基中，37℃150rpm摇床振荡培养8-12小时，制成大罐发酵菌种；

c枯草芽孢杆菌液体发酵培养基的制备：发酵罐空消后，加入不高于总容积70％的枯草芽孢杆菌液体发酵培养基，121℃实消灭菌30min以上，冷却至室温；

d枯草芽孢杆菌菌种的液体发酵：将步骤b中发酵完成的大罐发酵菌种接种至步骤c中制备的枯草芽孢杆菌液体发酵培养基中，接种量为枯草芽孢杆菌液体发酵培养基体积的0.05％-0.15％；发酵罐中37℃发酵24小时；发酵完成后的枯草芽孢杆菌发酵液即为制备好的枯草芽孢杆菌制剂中的枯草芽孢杆菌菌种；或者将发酵完成的枯草芽孢杆菌发酵液加入辅料以喷雾干燥的方法制成菌种干粉；

e枯草芽孢杆菌制剂中培养基成分的配置：配置用于枯草芽孢杆菌培养的培养基，于粉碎搅拌机中粉碎为120目以上的粉状颗粒并搅拌均匀后装袋；

f枯草芽孢杆菌培养制剂中培养基成分的灭菌：采用高压蒸汽灭菌法或者Co60辐照灭菌法对所述步骤e中的培养基进行灭菌后待用；

g枯草芽孢杆菌培养制剂混合包装产品的生产：将步骤d中的枯草芽孢杆菌发酵液与步骤f中灭菌后的培养基，按照8∶92的质量比混合，控制含水量＜15％，然后分装为枯草芽孢杆菌培养制剂的真空包装产品；或者将步骤d中的菌种干粉与步骤f中灭菌后的培养基，按照1∶99的质量比混合，控制含水量＜8％，然后分装为枯草芽孢杆菌培养制剂的真空包装产品。

2.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法，其特征是，所述步骤d发酵过程中保持通气比≥2，搅拌转数为150rpm，溶氧相对值不低于20，以NaOH溶液调节培养基至pH7.0-8.0，罐压在0.04-0.06Mpa。

3.如权利要求1或2所述的一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法，其特征是，所述步骤e用于枯草芽孢杆菌培养的培养基为LB培养基或玉米豆粕无机盐培养基；所述LB培养基组成为：按质量百分数酵母粉20％、蛋白胨40％、氯化钠40％；所述玉米豆粕无机盐培养基组成为：按质量百分数玉米52％、豆粕40％、硫酸锰0.05％、硫酸镁1.25％、氯化钠1％，磷酸二氢钠1％、磷酸氢二钠4.7％。

4.如权利要求1或2所述的一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法，其特征是，所述步骤a适于细菌生长的培养基为LB培养基，所述LB培养基为：酵母粉5g，蛋白胨粉10g，氯化钠10g，加水定容至1000ml，以NaOH溶液调节至pH7.2。

5.如权利要求1或2所述的一种枯草芽孢杆菌培养制剂生产方法，其特征是，所述步骤f高压蒸汽灭菌法为：121℃高压蒸汽灭菌30分钟以上，冷却干燥，使培养基成分降至室温，含水量降低至12％以下，待用；所述Co60辐照灭菌法为以15-25Gy的剂量Co60辐照灭菌。

6.权利要求1或2制备的枯草芽孢杆菌培养制剂的开放式发酵方法，其特征是，开放式培养器消毒后，加入总容积60-70％的自来水并保持鼓风通气状态，倒入自来水重量5％的枯草芽孢杆菌培养制剂搅拌均匀，加热至发酵液沸腾后，向培养器中加入体积为发酵液体积0.05-0.25％的消泡剂；然后冷却至65℃，并于60-65℃通气培养18-24h，得到枯草芽孢杆菌开放式液体发酵制剂。

7.如权利要求6所述的枯草芽孢杆菌培养制剂的开放式发酵方法，其特征是，其特征是，所述枯草芽孢杆菌开放式液体发酵制剂用于动物饲料、发酵垫料或用于水产养殖。

8.如权利要求7所述的枯草芽孢杆菌培养制剂的开放式发酵方法，其特征是，所述枯草芽孢杆菌开放式液体发酵制剂用于动物饲料作为微生态添加剂，添加剂量为5L/吨。

9.如权利要求7所述的枯草芽孢杆菌培养制剂的开放式发酵方法，其特征是，所述枯草芽孢杆菌开放式液体发酵制剂用于发酵垫料，添加量为500ml/m³或者发酵垫料干重的0.1-0.5％。

10.如权利要求7所述的枯草芽孢杆菌培养制剂的开放式发酵方法，其特征是，所述枯草芽孢杆菌开放式液体发酵制剂用于水产养殖，每7-10天使用一次，池塘成品养殖净水每亩每次添加1-5L，工厂化高密度养殖添加量为每立方水体每次添加10-20ml。